francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

Figura 23 - Análise gráfica dos resultados obtidos por CGH array e qPCR. A.
Par de iniciador 1. B. Par de iniciador 2. As barras indicam as intensidades de sinal obtidas
nas duas metodologias. As linhas tracejadas representam o limite de perda e ganho
genômico utilizado na CGH array, log2 -0,30= 0,812 e log2 +0,30= 1,231, respectivamente.
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Para o mapeamento da deleção do gene ROBO1, foram construídos
seis pares de iniciadores ao longo do éxon 4. Os iniciadores englobam
regiões intrônicas (anterior e posterior ao éxon 4), exônica e de sítio de
splice (Figura 36). Esse experimento foi realizado nos casos SM56 e SM37 e
em seis familiares, sendo dois da paciente SM56 (SM56.2 e SM56.3) e
quatro da SM37 (SM37.2, SM37.3, SM37.4 e SM37.5).
Para o cálculo da eficiência, as reações foram realizadas triplicata em
duas placas de 96 poços: (1) contendo os genes endógenos (HPRT e
GAPDH) e três iniciadores do gene alvo (P1, P2 e P3) e (2) contendo os
mesmos genes endógenos e outros três iniciadores para o gene alvo (P4, P5
e P6). A eficiência da PCR para os genes endógenos e alvo estão descritos
na Tabela 31.