francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

(1100delC) e TP53. Neste estudo, foram identificadas 18 mutações
patogênicas no gene BRCA1, sete no gene BRCA2, uma no CHEK2 e
nenhuma no TP53. Dos 136 pacientes, 65 preenchiam os critérios de Mama-
Cólon e foram selecionados para o estudo de triagem de CNVs.
3.2 METODOLOGIA
3.2.1 Obtenção de DNA genômico
O DNA genômico (gDNA) foi obtido a partir de linfócitos do sangue
periférico de todos os pacientes e familiares selecionados para o estudo. Em
um caso foi também utilizado o gDNA de tecido tumoral (caso SM89). O
DNA das amostras foi obtido no Banco de Macromoléculas do Hospital A.C.
Camargo, SP, sob a supervisão da Dra Dirce M. Carraro.
A extração de gDNA a partir de sangue periférico foi realizada
segundo o protocolo recomendado pelo fornecedor do Puregene Genomic
Purification Kit – Gentra (Qiagen). O isolamento do gDNA do tecido tumoral
foi baseado no método de digestão com 20 mg/uL proteinase K (Sigma) e
adição de 1 mL do reagente fenol: clorofórmio: álcool isoamílico (25:24:1)
(Invitrogen). A precipitação do DNA foi realizada com etanol 100% gelado e
acetato de amônio 7M. Após a obtenção do precipitado, o DNA foi eluído em
água ultra pura estéril. Em seguida, o gDNA obtido a partir de sangue
periférico e tecido tumoral foram quantificados em espectrofotômetro
NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) e
armazenados a -20ºC
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