francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

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Para a confirmação da deleção por aCGH como evento primário para
o desenvolvimento e predisposição dos tumores de mama e cólon, foram
realizadas duas análises de amplificação do DNA genômico: a primeira, nas
regiões flanqueadas pelas sondas envolvidas em perdas nos pacientes e em
seus familiares e, a segunda, na região do éxon mais próximo as sondas
alteradas.
No primeiro experimento foram utilizados dois pares de iniciadores, o
primeiro englobando uma das sondas mapeadas na região intrônica e o
segundo englobando a sonda mapeada no éxon mais próximo da região
alterada. A alteração na região intrônica foi confirmada no caso SM37 e na
parente SM37-2. Já a região contendo a sonda exônica foi considerada
normal, ou seja, sem alteração no número de cópias. No segundo
experimento foram utilizados seis pares de iniciadores flanqueando todo o
éxon 4, incluindo regiões intrônicas (anterior e posterior ao éxon), exônicas e
sítios de splicing alternativo. Foi observado que a perda intrônica identificada
no caso SM37 e na parente SM37.2 estendeu-se até o éxon 4, resultando
possivelmente numa proteína truncada, com a perda do domínio Ig-like I,
domínio de ligação com a proteína SLIT2.
A análise da expressão da proteína ROBO1 foi realizada no tecido
normal adjacente ao tumor da paciente SM37 e em amostras independentes
de carcinoma mamário e colorretal hereditários. No tecido normal, usado
como controle, identificou-se marcação forte da proteína, um dado relatado
no The Human Protein Atlas (www.proteinatlas.org). Nas amostras
independentes de carcinoma mamário e colorretal provenientes de pacientes