francine blumental de abreu - PHL © Elysio - FUNDAÇÃO ANTÔNIO ...

Análise dos dados de qPCR
Os valores de Cq (ciclo de quantificação) para cada diluição do DNA e
as concentrações dos mesmas (log10 DNA) foram utilizados para a
construção da curva padrão. A partir desta curva foi calculada a equação da
reta e o valor da sua inclinação ou slope. O cálculo da eficiência da
amplificação foi obtido pela fórmula E=10 (-1/slope) -1. Os ensaios
demonstraram eficiências próximas a 100%, indicando que ao final de cada
ciclo o transcrito molde estava duplicado. Em alguns casos houve uma
variação de cerca de 10%, porém isso não interferiu significativamente nos
resultados obtidos. Os picos das curvas de dissociação foram avaliados para
verificar a especificidade do produto amplificado.
O intervalo do número de cópias do gene ROBO1 foi avaliado pelo
método 2 -∆∆Cq (Livak e Schmittgen, 2001).
2 -∆∆Cq = 2
–[ΔCq (alvo) – ΔCq (referência)]
Para o cálculo do ΔCq (alvo) foi realizada a subtração da média do Cq
das duplicatas do gene alvo no grupo amostral e no grupo controle e para o
cálculo do ΔCq (referência) foi realizada a subtração da média do Cq das
duplicatas do gene referência no grupo amostral e no grupo controle.
3.2.5 Imunoistoquímica (IHQ)
A expressão da proteína ROBO1 foi avaliada por imunoistoquímica.
Esta proteína foi selecionada a partir dos resultados obtidos na análise por
CGH array. A metodologia foi aplicada em lâminas obtidas de um bloco de
parafina de um único caso tumoral (SM37) e de microarranjos de tecido
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