Liečivé rastliny v meniacich sa environmentálnych podmienkach

Vliv biotických a abiotických stresorů na vlastnosti rostlin 11.5.2005
potrebné stanoviť podmienky pre izoláciu aktívnych chloroplastov a optimalizovať reakčné
podmienky pre meranie rýchlosti Hillovej reakcie.
Materiál a metodika
Pre experimenty sme používali listy zo 16 ročného stromu druhu Phytolacca dioica L.,
s výškou 2 m rastúceho v skleníku Katedry fyziológie rastlín Prírodovedeckej fakulty UK v
Bratislave, ktorý bol získaný z Huntingtonskej botanickej záhrady v Kalifornii. Tu rastie v pôde
zloženej zo zmesi piesku, rašeliny a antuky s nízkym obsahom humusu a s hodnotou pH 7,2. Listy
sa odobrali v roku 2003 v mesiacoch máj až júl (letný režim) a v novembri až januári (zimný
režim).
Pre stanovenie listovej plochy sme listy rozdelili do 10 veľkostných kategórií (I až X).
Priemernú hodnotu listovej plochy sme získali z 10 listov pre každú kategóriu. Na základe plošného
obrysu na filtračnom papiery sme použitím priamej úmernosti určili listovú plochu. Priemernú
hmotnosť listov sme stanovili, vzhľadom na hmotnosť štvorca filtračného papiera s plochou 100
cm 2 .
Pre izoláciu aktívnych chloroplastov sme použili 50 g listov všetkých veľkostných
kategórii, tie sme zhomogenizovali so 150 ml izolačného média (0,5 M roztok sacharózy vo
fosfátovom pufre s hodnotou pH 7,4). Homogenát (25 ml) sa prefiltroval a centrifugoval pri 9 650
x g 15 min. Získaný sediment sa resuspendoval v 40 ml resuspendačného média (RM). Sledovali
sme vplyv dvoch resuspendačných médií rôzneho zloženia s rovnakou hodnotou pH (6,5) na
stabilitu a tým i na aktivitu chloroplastov. Prvé (RM A) predstavoval fosfátový pufor 6,5 s 10 %
podielom glycerínu a druhé (RM B) vodný roztok 0,35 M sacharózy a 0,05 M TRIS-u.
Resuspendované chloroplasty sme udržiavali v tme pri teplote 3°C.
Fotochemickú aktivitu izolovaných chloroplastov (Hillova reakcia) sme stanovili pri vlnovej
dĺžke 630 nm na spektrofotometri typu Jenway 6400. Aktivitu chloroplastov sme vyjadrili
percentuálne na základe prírastku redukovanej formy sodnej soli 2,6- dichlórfenolu-indofenolu
(DCPIP) (100 μmol. ml -1 ) v reakčnej zmesi zloženej z 1 ml suspenzie chloroplastov s obsahom
chlorofylu 9,23 ± 0,10 mg. ml -1 (letný režim) a 8,74 ± 0,02 mg. ml -1 (zimný režim) a 9 ml DCPIP
podľa /4/. Rýchlosť Hillovej reakcie sme sledovali pri viacerých expozičných časoch, a to: 30, 60,
120, 180, 240 a 300 s.
Inhibičný vplyv šiestich kovov na Hillovu reakciu /4/ sme sledovali v reakčnej zmesi
zloženej z 1 ml suspenzie chloroplastov, 8,9 ml DCPIP a s prídavkom 0,1 ml definovanej
koncentrácie ťažkého kovu, resp. 0,1 ml destilovanej vody v prípade kontroly. Pre všetky kovy sme
z regresnej rovnice vypočítali hodnotu ED 50 .
Výsledky a diskusia
Vegetatívny aparát skúmaného druhu Phytolacca dioica L. sa vyznačuje nielen rôznorodou
veľkosťou, ale aj veľkou heterogenitou listov, čo súvisí s vekovým i vývinovým štádiom listov. Z
analýz listovej plochy vyplýva, že priemerná plocha listov predstavuje 27,27 cm 2 pre najmenšie
listy patriace do I. kategórie, pre stredne veľké listy zaradené v V. kategórii je to v priemere 180,66
cm 2 a priemerná listová plocha najväčších listov z X. kategórie je 619,58 cm 2 (obr.1 A). Tomu
zodpovedá priemerná hmotnosť listov, ktorá sa pohybuje v rozmedzí od 0,76 g pre listy I. kategórie
až po 20,22 g pre listy z X. kategórie, stredne veľké listy majú v priemere hmotnosť 4,46 g (obr.1
B).
198