LieÃ„ÂivÃƒÂ© rastliny v meniacich sa environmentÃƒÂ¡lnych podmienkach

More documents

Recommendations

Info

Vliv biotických a abiotických stresorů na vlastnosti rostlin 11.5.2005 Materiál a metodika Pro studium lokalizace AOS a stanovení aktivit antioxidačních enzymů, byl vybrán soubor šesti genotypů Lactuca spp.: L. sativa (UCDM2, Mariska), L. serriola (LSE/18, PIVT 1309), L. saligna (CGN 05271) a L. virosa (NVRS 10.001 602) s různým fenotypem exprese náchylnosti/rezistence vůči zvolené rase Bremia lactucae Regel. Rostliny byly pěstovány ve fytotronu při fotoperiodě 12h a teplotě 18/15°C. Ve vývojovém stádiu cca 8 týdnů byly inokulovány suspenzí spor B. lactucae (rasa NL 16) a ve tmě kultivovány při teplotě 12/15°C /8/. Kontrolní neinokulované rostliny byly pěstovány za stejných podmínek. V intervalech 6, 12, 18, 24, 36, 48, 96 hodin po inokulaci (hai) byly odebírány listy a 1/ okamžitě podrobeny histochemickým metodám; 2/ zamraženy v tekutém dusíku a skladovány v -80°C pro biochemické testy. Histochemické metody Lokalizace produkce peroxidu vodíku in situ byla stanovena reakcí H 2 O 2 s diaminobenzidinem (DAB) za vzniku tmavě hnědé sraženiny. POX byla detekována inkubací v roztoku DAB s přídavkem H 2 O 2 . Tvorba superoxidového anionu (O 2 - ) in situ byla detekována na základě produkce nerozpustného modrofialového formazanu po interakci s NBT. Infiltrace barviv do rostlinného pletiva byla provedena ve vakuu po dobu 5h. Povařením v ethanolu byl extrahován chlorofyl a zastaveny enzymové reakce. Použité metody jsou podrobně popsány v práci Mlíčková et al. /9/. Biochemické metody Aktivity enzymů (guajakol-POX, CAT, SOD), obsah peroxidu vodíku a změny v zastoupení izoenzymů POX a SOD, byly studovány v extraktech listů kontrolních a infikovaných rostlin ve třech opakováních za použití tří nezávislých souborů rostlin. Extrakty pro stanovení enzymových aktivit byly připraveny v 0,05 M fosfátovém pufru (pH 7,0) s 1% polyvinylpolypyrrolidonem, pro izolaci peroxidasy byly zařazeny další dva kroky: 1/ 1% Tritonem byl extrahován membránově vázaný enzym a 2/ 0,1M KCl enzym iontově vázaný /10/. Spektrofotometrické metody byly použity pro detekci guajakol-POX /11/, CAT /11/, SOD /12/ a pro kvantifikaci peroxidu vodíku /13/. Koncentrace proteinu byla stanovena Lowryho metodou /14/. Pro stanovení isoenzymového spektra POX a SOD bylo použita metoda nativní elektroforézy v PAGE /15/. Výsledky a diskuse Studium produkce AOS a změn aktivit antioxidačních enzymů provázejících patogenezi B. lactucae navázalo na předchozí studium základních rozdílů v rychlosti a kvalitě odezvy buněk různých genotypů Lactuca spp. na infekci daným patogenem /8,16/. Kombinací biochemických a histochemických metod byly zjištěny skutečnosti, které lze shrnout v následujících bodech: 1/ Relativně nízké hodnoty hladiny peroxidu vodíku i aktivit antioxidačních enzymů v listových pletivech Lactuca spp. ve srovnání s jinými patosystémy /7,9,11/; 2/ Nebyla prokázána přítomnost superoxidu, aktivita SOD byla nízká u náchylných i rezistentních genotypů, nedocházelo ke změnám aktivity po napadení B. lactucae; 3/ Velmi široké je spektrum biochemických změn u genotypů s různým průběhem cytologické/histologické reakce k danému izolátu patogenu; 4/ V pletivech Lactuca spp. má hlavní podíl cytosolická POX, aktivita iontově a membránově vázaných POX je zanedbatelná; 5/ V aktivitě POX dochází k výrazným změnám v počátečních fázích infekce (6-12 hai), především pak u rezistentního genotypu L. virosa (NVRS 10.001 602), po 18 hai se na rozkladu peroxidu vodíku účastní intenzivněji CAT; 6/ Zvýšená koncentrace H 2 O 2 detekovaná po 24 hai u rezistentního genotypu L. virosa (NVRS 10.001 602) se podílí na indukci a průběhu HR (viz obr. 1); 7/ U L. saligna (CGN 05172) dochází k nárůstu peroxidu vodíku 24 hai, aktivita CAT byla lehce zvýšena 6-18 hai, POX začíná narůstat po 24 hai, což koresponduje s předpokladem jiné než rasově specifické rezistence u tohoto genotypu, ale i jeho fenotypovým projevem (vývoj patogenu a exprese HR jsou zpožděny) (viz obr. 2); 275
Vliv biotických a abiotických stresorů na vlastnosti rostlin 11.5.2005 8/ Kvantifikace dat získaných histochemickou detekcí je zatížena subjektivní chybou a vypovídá spíše o rozsahu než intenzitě zabarvení, tj. přítomnosti zvýšené aktivity POX resp. zvýšené koncentrace AOS v pletivech (Tab. 1, 2). L. virosa (NVRS 10.001 602) L. virosa (NVRS 10.001 602) 350,00 60 POX (nkat/1g FW) 300,00 250,00 200,00 150,00 100,00 50,00 0,00 0 6 12 18 24 36 48 96 H2O2 (μmol/g FW) 50 40 30 20 10 0 0 6 12 18 24 36 48 96 Čas (hai) Čas (hai) Obr. 1: Srovnání časových změn koncentrace peroxidu vodíku a aktivity peroxidasy u rezistentního genotypu L. virosa (NVRS 10.001 602). POX (nkat/1g FW) 350,00 300,00 250,00 200,00 150,00 100,00 50,00 L. saligna (CGN 05271) 0,00 0 6 12 18 24 36 48 96 Čas (hai) H2O2 (μmol/g FW) L. saligna (CGN 05271) 60 50 40 30 20 10 0 0 6 12 18 24 36 48 96 Čas (hai) Obr. 2: Srovnání časových změn koncentrace peroxidu vodíku a aktivity peroxidasy u rezistentního genotypu L. saligna (CGN 05271) vlivem patogeneze B. lactucae. 276
Page 4 and 5:
Vliv abiotických a biotických str
Page 6 and 7:
Page 8 and 9:
Page 10 and 11:
Page 12 and 13:
Page 14 and 15:
Page 16 and 17:
Page 18 and 19:
Page 20 and 21:
Page 22 and 23:
Page 24 and 25:
Page 26 and 27:
Page 28 and 29:
Page 30 and 31:
Page 32 and 33:
Page 34 and 35:
Page 36 and 37:
Page 38 and 39:
Page 40 and 41:
Page 42 and 43:
Page 44 and 45:
Page 46 and 47:
Page 48 and 49:
Page 50 and 51:
Page 52 and 53:
Page 54 and 55:
Page 56 and 57:
Page 58 and 59:
Page 60 and 61:
Page 62 and 63:
Page 64 and 65:
Page 66 and 67:
Page 68 and 69:
Page 70 and 71:
150 Vliv abiotických a biotických
Page 72 and 73:
Page 74 and 75:
Page 76 and 77:
Page 78 and 79:
Page 80 and 81:
Page 82 and 83:
Page 84 and 85:
Page 86 and 87:
Page 88 and 89:
Page 90 and 91:
Page 92 and 93:
Page 94 and 95:
Page 96 and 97:
Page 98 and 99:
Page 100 and 101:
Page 102 and 103:
Page 104 and 105:
Page 106 and 107:
Page 108 and 109:
Page 110 and 111:
Page 112 and 113:
Page 114 and 115:
Page 116 and 117:
Page 118 and 119:
Page 120 and 121:
Page 122 and 123:
Page 124 and 125:
Page 126 and 127:
Page 128 and 129:
Page 130 and 131:
Page 132 and 133:
Page 134 and 135:
Page 136 and 137:
Page 138 and 139:
Page 140 and 141:
Page 142 and 143:
Page 144 and 145:
Page 146 and 147:
Page 148 and 149:
Page 150 and 151:
Page 152 and 153:
Page 154 and 155:
Page 156 and 157:
Page 158 and 159:
Page 160 and 161:
Page 162 and 163:
Page 164 and 165:
Page 166 and 167:
Page 168 and 169:
Page 170 and 171:
Page 172 and 173:
Page 174 and 175:
Page 176 and 177:
Page 178 and 179:
Page 180 and 181:
1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4
Page 182 and 183:
Page 184 and 185:
Page 186 and 187:
Vliv biotických a abiotických str
Page 188 and 189:
Page 190 and 191:
Page 192 and 193:
Page 194 and 195:
Page 196 and 197:
Page 198 and 199:
Page 200 and 201:
Page 202 and 203:
Page 204 and 205:
Page 206 and 207:
Page 208 and 209:
Page 210 and 211:
Page 212 and 213:
Page 214 and 215:
Page 216 and 217:
Page 218 and 219:
Page 220 and 221:
Page 222 and 223:
Page 224 and 225: Vliv biotických a abiotických str
Page 318 and 319: Vliv abiotických a biotických str
Page 324 and 325:
Page 326 and 327:
Page 328 and 329:
Page 330 and 331:
Page 332 and 333:
Page 334 and 335:
Page 336 and 337:
Page 338 and 339:
Page 340 and 341:
Page 342 and 343:
Page 344 and 345:
Page 346 and 347:
Page 348 and 349:
Page 350 and 351:
Page 352 and 353:
Page 354 and 355:
Page 356 and 357:
Page 358 and 359:
Page 360 and 361:
Page 362 and 363:
Page 364 and 365:
Page 366 and 367:
Page 368 and 369:
Page 370 and 371:
Page 372 and 373:
Page 374 and 375:
Page 376 and 377:
Page 378 and 379:
Page 380 and 381:
Page 382:
show all

LieÃ„ÂivÃƒÂ© rastliny v meniacich sa environmentÃƒÂ¡lnych podmienkach

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?

LieÃ„ÂivÃƒÂ© rastliny v meniacich sa environmentÃƒÂ¡lnych podmienkach