Liečivé rastliny v meniacich sa environmentálnych podmienkach

Vliv abiotických a biotických stresorů na vlastnosti rostlin 11.5.2005
Materiál a metodika
Kalusová kultura byla odvozena z kořenové části klíční rostliny Silybum marianum (L.)
GAERTN.
Kalusová kultura byla kultivována na mediu Murashigeho a Skooga (MS) /4/ s obsahem α-NAA 10
mg/l jako růstového regulátoru. Kultivace probíhala za normálního denního světelného režimu a
pokojové teploty. K pokusům byly použity kalusové kultury v 10.-25. pasáži. Ke kalusovým
kulturám byl přidán 1 ml roztoku elicitoru ve 4 různých koncentracích (c 1 -100 mg/l ; 2,59.10 -4
mol/l); (c 2 -10 mg/l ; 2,59.10 -5 mol/l); (c 3 -1,0 mg/l; 2,59.10 -6 mol/l); (c 4 -0,1 mg/l; 2,59.10 -7 mol/l).
Elicitace probíhala 12, 24, 48, 72 a 168 hodin. Po uplynutí této doby byly kultury odebrány,
usušeny za laboratorní teploty . Kontrolní vzorky (bez elicitace) byly odebrány po 24 a 168 hod.
Obsah flavonolignanů byl stanoven metodou HPLC /5/. Ke stanovení byla použita kolona
LiChrospher RP-18 250x4. Jako mobilní fáze byl použit:
- čase 0-5 min gradient z vody s obsahem 0,3 % H 3 PO 4 na 50 % vodný roztok z metanolu
s obsahem 0,3 % H 3 PO 4
- v čase 5-25 minut isokraticky 50 % vodný výluh metanolu s obsahem 0,3 % H 3 PO 4. Průtok
byl 1,4 ml/min.
Suché kalusy byly nejprve upráškovány a poté extrahovány 2 x 10 ml metanolu po dobu 10 min.
Spojené výluhy byly doplněny na objem 25,0 ml. Tento roztok byl přefiltrován přes teflonový filtr o
velikosti pórů 22 μl a přenesen do vialky.
Takto zpracovaný vzorek byl podroben HPLC analýze. Vzorky byly sledovány při 288 nm.
Identifikace obsahových látek byla provedena porovnáním retenčních časů a spekter příslušných
píků vzorků se standardem silymarinu.
Výsledky a diskuse
Práce je zaměřena na zvýšení produkce flavonolignanů v kalusové kultuře Silybum marianum.
K ovlivnění produkce flavonolignanů byl použit abiotický elicitor (5-brom-2-hydroxyfenyl)amid 5
terc.butyl-6-chlorpyrazin -2-karboxylové kyseliny. Statisticky významná produkce byla
zaznamenána po 12 a 24 hodinové elicitaci při použití elicitoru v koncentraci c 1 , c 2 a c 3 . Dále u
koncencentrace c 2 , c 3 a c 4 po 48 hodinové elicitaci , u koncentrace c 4 též po 72 hodinové licitaci
(Fig. 1).
Největší obsah flavonolignanů v kalusové kultuře po elicitaci(5-brom-2-hydroxyfenyl)amid 5
terc.butyl-6-chlorpyrazin -2-karboxylové kyseliny nastal po 24 hodinách při použití elicitoru
v koncentraci c 1 (2,59.10 -4 mol/l), nárůst v obsahu činil 1039 % (Fig. 1).
324