LieÃ„ÂivÃƒÂ© rastliny v meniacich sa environmentÃƒÂ¡lnych podmienkach

More documents

Recommendations

Info

Vliv biotických a abiotických stresorů na vlastnosti rostlin 11.5.2005 Elektrochemická analýza DPASV analýza byla prováděna pomocí elektrochemického analyzátoru AUTOLAB (EcoChemie, Netherlands) v zapojení s tříelektrodovou celou VA-Stand 663 (Metrohm, Switzerland). Byla použita pracovní elektroda – HMDE (plocha rtuťové kapky: 0.4 mm 2 ), referentní elektroda (Ag/AgCl, 3 M KCl) a uhlíková tyčinka jako pomocná elektroda. Získaná data byla upravena matematickou korekcí podle algoritmů navržených Savitzkym a Golayem implementovaných do GPES softwaru (EcoChemie). Experimenty byly prováděny při laboratorní teplotě, v potenciálovém roz<strong>sa</strong>hu od –1,2 V do +0,1 V, potenciálový krok 1,05 mV, pulsní amplituda 25,05 mV, časový interval 0,2 s, doba akumulace 240 s, potenciál akumulace –1,1 V. Jako základní elektrolyty byl použit acetátový pufr (0,2 M CH3COOH + 0,2 M CH3COONa) a 0,1 M KCl. Výsledky a diskuse Byl sledován vliv iontů těžkých kovů na kultury raných somatických embryí (RSE) smrku. Byly využity kultury RSE smrku ztepilého (Picea abies /L./ Karst.), klony 2/32 a 3/5 H, a smrku pichlavého (Picea pungens Engelm.), klon PE 14. Byl sledován růst kultur a odumírání RSE při třech koncentracích Pb(NO 3 ) 2 a Cd(NO 3 ) 2 .4H 2 O v kultivačním médiu. Základními parametry pro sledování vlivu abiotických a biotických stresů na kulturu RSE smrku je růstová křivka a životnost. Abychom mohli sledovat růst kultur a srovnat jednotlivé varianty s těžkými kovy, musíme využít objektivní metody, které toto umožní. Jednou z vhodných metod, která charakterizuje růst kultur RSE smrku, je metoda analýzy obrazu. Pomocí této metody byly zjištěny plochy jednotlivých shluků raných somatických embryí, které dávají základní informaci o průběhu jejich růstu. Analýza obrazu je analytický nástroj při studiu růstu buněčných kultur. Vzhledem ke své jednoduchosti a dobré reprodukovatelnosti je použitelná pro studium somatické embryogeneze u řady rostlinných druhů. Své uplatnění nalezla také v případě automatizace produkce somatických embryí /16/. Pomocí analýzy obrazu mohou být zjištěny parametry jako tvar, velikost nebo barva kultury. Tato metoda nachází uplatnění při studiu suspenzních kultur i kultur na tuhých a polotuhých médiích /17/. Analýza obrazu se ukázala být vhodnou alternativní metodou pro stanovení růstu k metodě gravimetrické, která je při stanovení nejčastěji využívána. Pomocí analýzy obrazu lze stanovit plochu (přírůstek plochy za čas) RSE bez za<strong>sa</strong>hování do kultivovaného biologického materiálu, a tím nedochází k destrukci nebo kontaminaci kultury (u gravimetrické metody nelze zajistit). Nevýhodou metody analýzy obrazu zůstává nesprávné vyjádření růstu kultur, neboť SRSE smrku jsou prostorové útvary, a proto vyjádření jejich růstu pomocí plochy je nepřesné. Z tohoto důvodu byla metoda analýzy obrazu porovnána s klasickou metodou sledující růst biologického materiálu – vážením (gravimetrická metoda). Z výsledků obou pokusů je patrný podstatný rozdíl mezi přírůstky plochy a hmotnosti. Po dobu 14 dnů (běžná doba kultivace) mají růstové křivky získané oběma metodami stejný charakter (Obr. 4A,B), proto lze vážení nahradit analýzou obrazu, která je pro stanovení růstu kultury RSE smrku vhodnější. přírůstek plochy SRSE v % 200 150 100 50 0 hmotnost plocha A 1 3 5 7 9 11 13 počet dnů kultivace Obr. 4: (A) Růstová křivka SRSE klonu 2/32; stanoveno pomocí analýzy obrazu a vážení; doba kultivace 14 dní; chybová úsečka vyznačuje střední chybu. (B) Růst SRSE klonu 2/32 v prvních dvou týdnech v kultuře; korelace mezi přírůstky hmotnosti a ploch SRSE; hodnoty byly získány průměrem z 10 shluků. přírůstek plochy SRSEi v % Po vybrání vhodné metody pro stanovení růstu jsme již mohli přistoupit ke sledování vlastního vlivu těžkých kovů (Pb-EDTA, Cd-EDTA) na kulturu RSE. Na obr. 5A a 5B je ukázán vliv Pb-EDTA a Cd-EDTA na jednotlivé SRSE smrku ztepilého 2/32 a smrku pichlavého PE 14 (Obr. 5C,D). Sledovali jsme růst jednotlivých SRSE v přítomnosti těžkých kovů. Nejnižší aplikovaná koncentrace kopírovala průběh růstu 223 80 60 40 20 0 y = 0,4452x R 2 = 0,988 0 50 100 150 přírůstek čerstvé hmotnosti SRSE v % B
Vliv biotických a abiotických stresorů na vlastnosti rostlin 11.5.2005 kontrolních SRSE, při koncentraci 250 μM došlo k výrazné růstové depresi. U koncentrace 500 μM jsme opakovaně pozorovali výrazný efekt zvětšení plochy SRSE, což je pravděpodobně způsobeno zvýšeným příjmem vody do SRSE, který se tak patrně snaží snížit koncentraci těžkého kovu uvnitř shluku. Další možností, jak sledovat vliv těžkých kovů na kulturu RSE smrku, je stanovení životnosti kultury. Životnost RSE smrku byla stanovena pomocí a) tzv. dvojitého barvení fluorescenčními barvivy – fluoresceindiacetátem (FDA) a propidium jodidem (PI) a b) sledováním funkčního metabolizmu buněk pomocí intracelulárních esteráz (Obr. 6A,B). Při sledování životnosti RSE byl zjištěn očekávaný průběh, tedy maximální toxicita u nejvyšší aplikované koncentrace (u stanovení životnosti pomocí fluorescenčních barviv) a snižující se aktivita intracelulárních esteráz se stoupající koncentrací těžkého kovu v kultivačním médiu. přírůstek plochy v % 300 200 100 kon Pb1 Pb2 Pb3 2/32 přírůstek plochy v % 300 200 100 kon Pb1 Pb2 Pb3 PE 14 B 0 4 8 12 počet dnů kultivace 0 4 8 12 počet dnů kultivace přírůstek plochy v % 300 200 100 kon Cd1 Cd2 Cd3 2/32 C přírůstek plochy v % 300 200 100 kon Cd1 Cd2 Cd3 PE 14 D 0 4 8 12 počet dnů kultivace 0 4 8 12 počet dnů kultivace Obr. 5: Vliv těžkých kovů na růst SRSE smrku; koncentrace těžkých kovů (Pb-EDTA, Cd-EDTA) v kultivačním médiu 0, 50, 250 a 500 μM. (A) Vliv Pb-EDTA na růst SRSE klonu 2/32; (B) Vliv Pb-EDTA na růst SRSE klonu PE 14; (C) Vliv Cd-EDTA na růst SRSE klonu 2/32; (D) Vliv Cd-EDTA na růst SRSE klonu PE 14. A B 224
Page 4 and 5:
Vliv abiotických a biotických str
Page 6 and 7:
Page 8 and 9:
Page 10 and 11:
Page 12 and 13:
Page 14 and 15:
Page 16 and 17:
Page 18 and 19:
Page 20 and 21:
Page 22 and 23:
Page 24 and 25:
Page 26 and 27:
Page 28 and 29:
Page 30 and 31:
Page 32 and 33:
Page 34 and 35:
Page 36 and 37:
Page 38 and 39:
Page 40 and 41:
Page 42 and 43:
Page 44 and 45:
Page 46 and 47:
Page 48 and 49:
Page 50 and 51:
Page 52 and 53:
Page 54 and 55:
Page 56 and 57:
Page 58 and 59:
Page 60 and 61:
Page 62 and 63:
Page 64 and 65:
Page 66 and 67:
Page 68 and 69:
Page 70 and 71:
150 Vliv abiotických a biotických
Page 72 and 73:
Page 74 and 75:
Page 76 and 77:
Page 78 and 79:
Page 80 and 81:
Page 82 and 83:
Page 84 and 85:
Page 86 and 87:
Page 88 and 89:
Page 90 and 91:
Page 92 and 93:
Page 94 and 95:
Page 96 and 97:
Page 98 and 99:
Page 100 and 101:
Page 102 and 103:
Page 104 and 105:
Page 106 and 107:
Page 108 and 109:
Page 110 and 111:
Page 112 and 113:
Page 114 and 115:
Page 116 and 117:
Page 118 and 119:
Page 120 and 121:
Page 122 and 123:
Page 124 and 125:
Page 126 and 127:
Page 128 and 129:
Page 130 and 131:
Page 132 and 133:
Page 134 and 135:
Page 136 and 137:
Page 138 and 139:
Page 140 and 141:
Page 142 and 143:
Page 144 and 145:
Page 146 and 147:
Page 148 and 149:
Page 150 and 151:
Page 152 and 153:
Page 154 and 155:
Page 156 and 157:
Page 158 and 159:
Page 160 and 161:
Page 162 and 163:
Page 164 and 165:
Page 166 and 167:
Page 168 and 169:
Page 170 and 171:
Page 172 and 173: Vliv abiotických a biotických str
Page 180 and 181: 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4
Page 186 and 187: Vliv biotických a abiotických str
Page 272 and 273:
Vliv biotických a abiotických str
Page 274 and 275:
Page 276 and 277:
Page 278 and 279:
Page 280 and 281:
Page 282 and 283:
Page 284 and 285:
Page 286 and 287:
Page 288 and 289:
Page 290 and 291:
Page 292 and 293:
Page 294 and 295:
Page 296 and 297:
Page 298 and 299:
Page 300 and 301:
Page 302 and 303:
Page 304 and 305:
Page 306 and 307:
Page 308 and 309:
Page 310 and 311:
Page 312 and 313:
Page 314 and 315:
Page 316 and 317:
Page 318 and 319:
Page 320 and 321:
Page 322 and 323:
Page 324 and 325:
Page 326 and 327:
Page 328 and 329:
Page 330 and 331:
Page 332 and 333:
Page 334 and 335:
Page 336 and 337:
Page 338 and 339:
Page 340 and 341:
Page 342 and 343:
Page 344 and 345:
Page 346 and 347:
Page 348 and 349:
Page 350 and 351:
Page 352 and 353:
Page 354 and 355:
Page 356 and 357:
Page 358 and 359:
Page 360 and 361:
Page 362 and 363:
Page 364 and 365:
Page 366 and 367:
Page 368 and 369:
Page 370 and 371:
Page 372 and 373:
Page 374 and 375:
Page 376 and 377:
Page 378 and 379:
Page 380 and 381:
Page 382:
show all

LieÃ„ÂivÃƒÂ© rastliny v meniacich sa environmentÃƒÂ¡lnych podmienkach

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?

LieÃ„ÂivÃƒÂ© rastliny v meniacich sa environmentÃƒÂ¡lnych podmienkach