asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

204 Asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
Mehani~ki asistirani hatching ili parcijalna
disekcija zona pellucida-e se danas
re|e primenjuje.
Sl. 4.40- Mehani~ki asistirani hatching
Parcijalna disekcija zona pellucida-e se
obavlja na embrionu pozicioniranim holding
pipetom mikroiglom kroz zona pellucida-u
na mestu najve}eg perivitelinskog
prostora. Embrioni se potom vra}aju u
medijum kulture i kultivi{u do transfera.
Asistirani hatching je zapo~et parcijalnom
resekcijom zone pelucide. Ova metoda
je temeljno procenjena u vi{e studija.
Osnovno ograni~enje ove tehnike je
te{ko}a stvaranja rupe odre|ene veli~ine.
Asistirani hatching kiselim
Tyrode rastvorom
Embrioni se stabilizuju holding pipetom,
a 10 µm pipeta koja sadr`i kiseli Tyrode
rastvor je orijentisana na povr{inu na kojoj
nema perivitelinskog prostora.
U zona pellucida-u se napravi defekt
pre~nika oko 30 µm na spoljnoj povr{ini.
Embrioni se potom nekoliko puta isperu da
bi se uklonio vi{ak Tyrode rastvora i vra}aju
u standardni medijum kulture do transfera.
Primena ove tehnike dozvoljava formiranje
ve}eg i postojanijeg otvora na zona
pellucida-u. Me|utim, varijabilnost i izlaganje
kiselini, sa njenom mogu}om embriotoksi~no{}u
ostaju potencijalni problemi.
Sl. 4.41- Asistirani hatching kiselim Tyrode
rastvorom
Asistirani hatching laserom
Koristi se diodni laser talasne du`ine
1480 ηm u ra~unarski kontrolisanom bezkontaktnom
modu rada sa tri nivoa pode-
{avanja intenziteta energije, i to: slabo 35mW,
srednje 45mW i jako 55mW, koja se mo`e emitovati
jednim impulsom trajanja 25 ms.
Sl. 4.42- Asistirani hatching laserom
Niska snaga se koristi za perforiranje
veoma tanke zona pellucida-e do 10µm,
srednja snaga se koristi za perforaciju zona
pellucida-e ve}ine embriona 10 - 15µm, a
najve}a snaga se koristi za perforiranje
debele, preko 15µm zona pellucida-e.
Infracrvena laserska dioda talasne
du`ine 1.48 µm se ~ini najpogodnijom za
upotrebu u laboratoriji. Ovaj sistem dozvoljava