asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
IV Deo: Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> 273<br />
Kriofizika krioprezervacije<br />
spermatozoida<br />
Da bi }elije pre`ivele krioprezervaciju,<br />
krioza{titni agensi moraju biti prisutni prilikom<br />
hla|enja i tokom etapa zagrevanja.<br />
Krioza{titne supstance niske molekularne<br />
te`ine {tite }elije tako {to spre~avaju formiranje<br />
kristala leda u citoplazmi. Kontrolisana<br />
brzina hla|enja dozvoljava te~nosti<br />
iz citoplazme da iza|e iz }elije i da se zamrzne<br />
spolja. Ovo rezultuje postepenom<br />
dehidratacijom citoplazme koja ne ugro`ava<br />
o~uvanje sposobnosti za kasniji normalan<br />
rast i razvoj. Utvr|eno je da se spermatozoidi<br />
mogu skupiti za 75% svoje normalne<br />
veli~ine i pove}ati na 110% izoosmotskog<br />
}elijskog volumena, bez gubitka<br />
funkcionalnog integriteta.<br />
Sl. 4.76- Krioprezervirani spermatozoidi<br />
Tokom ovih osmotskih procesa koncentracija<br />
krioza{titnih agenasa unutar citoplazme<br />
se jako pove}ava i ako se ne obrati<br />
pa`nja tokom procesa krioprezervacije, ovi<br />
agensi mogu dosti}i toksi~ne nivoe. Optimalna<br />
brzina hla|enja i zagrevanja se<br />
posebno odre|uje za svaki tip }elije da bi<br />
se izbegla potencijalna fizi~ka o{te}enja i<br />
toksi~nost. Brzine hla|enja i zagrevanja su<br />
povezane sa volumenom }elije, njenom povr{inom,<br />
permeabilno{}u, energijom aktivacije<br />
{irenja te~nosti, kao i vrstom i koncentracijom<br />
upotrebljenih krioprotektanata.<br />
Permeabilni agensi, kao glicerol, se<br />
koriste, radi dehidratacije citoplazme }elije.<br />
Nepermeabilni agensi, kao {to je<br />
saharoza, dodaju se da pove}aju osmolaritet<br />
radi spre~avanja o{te}enja nekontrolisanim<br />
}elijskim oticanjem tokom procesa<br />
dehidratacije.<br />
Proteini, amino kiseline i drugi permeabilni<br />
molekuli mogu stabilizovati<br />
organele, ali se obi~no uklanjaju tokom<br />
procesa krioprezervacije.<br />
Sertifikovani krioprezervacioni rastvori,<br />
koji su na raspolaganju, nude stabilan izvor<br />
krioprotektivnih sredstava, pa treba izbegavati<br />
laboratorijski pripremljene rastvore,<br />
poput onih koji sadr`e `umance.<br />
Uspe{na krioprezervacija spermatozoida<br />
zavisi od optimalnih brzina hla|enja.<br />
Sporo hla|enje je kada se temperatura<br />
spusta brzinom manjom od 100° C/min, dok je<br />
kod brzog hlad|nja brzina 400° C/min. Stepen<br />
pre`ivljavanja spermatozoida je oko 90%.<br />
Indukovanje nukleacije leda, koje se<br />
obavlja pri krioprezervaciji embriona, tako|e<br />
pobolj{ava ishod i kod spermatozoida .<br />
Ranije primenjivanu krioprezervaciju u<br />
pari te~nog azota treba izbe}i i zameniti<br />
automatizovanom, sporom krioprezervacijom<br />
u opsegu od 2° C/min do 7° C/min,<br />
kada se uradi indukcija nukleacije leda.<br />
Na temperaturi od minus 30° C sledi<br />
uranjanje u te~ni azot.<br />
Metoda brzog zamrzavanja humanih<br />
materijala, pa i sperme, se naziva vitrifikacija.<br />
Pokazuje najbolje rezultate sa swim-up<br />
pripremljenim spermatozoidima bez krioprotektanata.<br />
U pore|enju sa konvencionalnim<br />
zamrzavanjem sa krioprotektantima, vitrifikacija<br />
spermatozoida bez krioprotektanata<br />
pokazuje bolje o~uvanje motiliteta i fertilnosti.<br />
U slede}em poglavlju }e biti vi{e re~i o<br />
vitrifikaciji.
Change language