asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
268 Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> u <strong>humanoj</strong> <strong>reprodukciji</strong><br />
je iznosila 11,2. Upadljivo je da je kod onih<br />
uzoraka u odnosima kortizol - kortizon<br />
ve}im od 11,2 bilo trudno}a, dok su kod<br />
svih uzoraka folikularne te~nosti sa odnosima<br />
kortizol - kortizon manjim od 11,2 bili<br />
neuspe{ni poku{aji.<br />
Ovi podaci daju zna~ajnu podr{ku<br />
hipotezi prema kojoj ovarijalna kortizol -<br />
kortizon me|ukonverzija, posredovana u<br />
folikulu putem jednog ili vi{e izoforma 11<br />
βHSD - 11β -hydroxysteroid dehydrogenaze,<br />
mo`e predvideti ishod IVF - in vitro fertilisation,<br />
samo pod definisanim okolnostima.<br />
Na kraju se postavlja pitanje za{to na<br />
direktna merenja ovarijalne aktivnosti 11<br />
βHSD - 11β - hydroxysteroid dehydrogenaze<br />
in vitro mogu uticati:<br />
• kultivacija granuloznih }elija u medijumu<br />
dopunjenim serumom tokom tri dana<br />
pre ispitivanja enzima,<br />
• ~uvanje aspirisanih }elija do 3 dana na<br />
temperaturi od 4° C u folikularnoj te~nosti ili<br />
medijumu pre izolacije i kultivacije }elija.<br />
Poznato je da granulozne luteinske<br />
}elije sinteti{u i lu~e parakrine inhibitore<br />
metabolizma kortizola. Kandidat za<br />
lokalnu inhibiciju ovarijalne aktivnosti 11<br />
βHSD - 11β - hydroxysteroid dehydrogenaze<br />
bi bio progesteron koji je glavni produkt<br />
lu~enja luteiniziraju}ih granuloznih<br />
}elija i koji je provereni inhibitor kloniranih<br />
izoforma 11β HSD - 11β - hydroxysteroid<br />
dehydrogenaze, naro~ito 11β HSD2<br />
- 11β - hydroxysteroid dehydrogenaze 2.<br />
Po{to se sinteza ovog steroida progresivno<br />
pove}ava dok se granulozne }elije<br />
luteiniziraju tokom 3 dana u medijumu sa<br />
serumom, serum-supplemented medium,<br />
rastu}a produkcija progesterona se mo`e<br />
pripisati smanjenju brzine metabolizma<br />
kortizola utvr|enog kod granuloznih }elija<br />
tokom prva tri dana kultivacije.<br />
Ova hipoteza je proverena suprimiranjem<br />
bazalne sekrecije progesterona iz kultivisanih<br />
granuloznih }elija pomo}u<br />
citohromnog P450 enzimskog inhibitora -<br />
aminoglutethimida.<br />
S jedne strane blokiranje sinteze progesterona<br />
podi`e ovarijalnu aktivnost 11β<br />
HSD - 11 β - hydroxysteroid dehydrogenaze<br />
potvr|uju}i da progesteron deluje kao<br />
lokalni inhibitor kortizol - kortizon me|ukonverzije<br />
kod kultivisanih granuloznih<br />
luteinskih }elija. S druge strane, ~ak i granulozne<br />
}elije kontinuirano inkubirane sa<br />
aminoglutethimidom izazivaju progresivan<br />
pad nivoa aktivnosti 11β HSD -11β -hydroxysteroid<br />
dehydrogenaze s obzirom na<br />
pove}anje ekspresije proteina 11β HSD -<br />
11β - hydroxysteroid dehydrogenaze, {to<br />
pokazuje da te }elije sigurno proizvode jo{<br />
neki enzimski inhibitor, osim progesterona.<br />
Granuloza luteinske }elije proizvode<br />
parakrine inhibitore aktivnosti 11β HSD -<br />
11β - hydroxysteroid dehydrogenaze za<br />
vreme kultivacije. Trenutno se ispituje da li<br />
su ovi modulatori enzima prisutni u folikularnoj<br />
te~nosti u kojoj su granuloza<br />
luteinske }elije ~uvane tokom tri dane pre<br />
separacije. Da bi obogatili bilo koji<br />
inhibitor enzima prisutan u folikularnoj<br />
te~nosti, usvojen je metod da se rastvore<br />
endogeni inhibitori 11β HSD - 11 β - hydroxysteroid<br />
dehydrogenaze iz urina. Uzorci<br />
folikularne te~nosti su stavljeni u C18 Seppak<br />
homatografske kertrid`e, iz kojih se<br />
jedinjenja rastu}e hidrofobnosti, jedno za<br />
drugim, ispiraju rastvorom sa rastu}om<br />
koncentracijom metanola. Svaki deo se<br />
potom testira da bi se videlo da li ima<br />
sposobnost da moduli{e bilo NADP + -<br />
nicotinamide adenine dinucleotide phosphate<br />
ili NADP - - nicotinamide adenine<br />
dinucleotide phosphate zavisnu oksidaciju<br />
kortizola pomo}u homogenata iz bubrega