03.12.2012 Views

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

SHOW MORE
SHOW LESS

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.

268 Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> u <strong>humanoj</strong> <strong>reprodukciji</strong><br />

je iznosila 11,2. Upadljivo je da je kod onih<br />

uzoraka u odnosima kortizol - kortizon<br />

ve}im od 11,2 bilo trudno}a, dok su kod<br />

svih uzoraka folikularne te~nosti sa odnosima<br />

kortizol - kortizon manjim od 11,2 bili<br />

neuspe{ni poku{aji.<br />

Ovi podaci daju zna~ajnu podr{ku<br />

hipotezi prema kojoj ovarijalna kortizol -<br />

kortizon me|ukonverzija, posredovana u<br />

folikulu putem jednog ili vi{e izoforma 11<br />

βHSD - 11β -hydroxysteroid dehydrogenaze,<br />

mo`e predvideti ishod IVF - in vitro fertilisation,<br />

samo pod definisanim okolnostima.<br />

Na kraju se postavlja pitanje za{to na<br />

direktna merenja ovarijalne aktivnosti 11<br />

βHSD - 11β - hydroxysteroid dehydrogenaze<br />

in vitro mogu uticati:<br />

• kultivacija granuloznih }elija u medijumu<br />

dopunjenim serumom tokom tri dana<br />

pre ispitivanja enzima,<br />

• ~uvanje aspirisanih }elija do 3 dana na<br />

temperaturi od 4° C u folikularnoj te~nosti ili<br />

medijumu pre izolacije i kultivacije }elija.<br />

Poznato je da granulozne luteinske<br />

}elije sinteti{u i lu~e parakrine inhibitore<br />

metabolizma kortizola. Kandidat za<br />

lokalnu inhibiciju ovarijalne aktivnosti 11<br />

βHSD - 11β - hydroxysteroid dehydrogenaze<br />

bi bio progesteron koji je glavni produkt<br />

lu~enja luteiniziraju}ih granuloznih<br />

}elija i koji je provereni inhibitor kloniranih<br />

izoforma 11β HSD - 11β - hydroxysteroid<br />

dehydrogenaze, naro~ito 11β HSD2<br />

- 11β - hydroxysteroid dehydrogenaze 2.<br />

Po{to se sinteza ovog steroida progresivno<br />

pove}ava dok se granulozne }elije<br />

luteiniziraju tokom 3 dana u medijumu sa<br />

serumom, serum-supplemented medium,<br />

rastu}a produkcija progesterona se mo`e<br />

pripisati smanjenju brzine metabolizma<br />

kortizola utvr|enog kod granuloznih }elija<br />

tokom prva tri dana kultivacije.<br />

Ova hipoteza je proverena suprimiranjem<br />

bazalne sekrecije progesterona iz kultivisanih<br />

granuloznih }elija pomo}u<br />

citohromnog P450 enzimskog inhibitora -<br />

aminoglutethimida.<br />

S jedne strane blokiranje sinteze progesterona<br />

podi`e ovarijalnu aktivnost 11β<br />

HSD - 11 β - hydroxysteroid dehydrogenaze<br />

potvr|uju}i da progesteron deluje kao<br />

lokalni inhibitor kortizol - kortizon me|ukonverzije<br />

kod kultivisanih granuloznih<br />

luteinskih }elija. S druge strane, ~ak i granulozne<br />

}elije kontinuirano inkubirane sa<br />

aminoglutethimidom izazivaju progresivan<br />

pad nivoa aktivnosti 11β HSD -11β -hydroxysteroid<br />

dehydrogenaze s obzirom na<br />

pove}anje ekspresije proteina 11β HSD -<br />

11β - hydroxysteroid dehydrogenaze, {to<br />

pokazuje da te }elije sigurno proizvode jo{<br />

neki enzimski inhibitor, osim progesterona.<br />

Granuloza luteinske }elije proizvode<br />

parakrine inhibitore aktivnosti 11β HSD -<br />

11β - hydroxysteroid dehydrogenaze za<br />

vreme kultivacije. Trenutno se ispituje da li<br />

su ovi modulatori enzima prisutni u folikularnoj<br />

te~nosti u kojoj su granuloza<br />

luteinske }elije ~uvane tokom tri dane pre<br />

separacije. Da bi obogatili bilo koji<br />

inhibitor enzima prisutan u folikularnoj<br />

te~nosti, usvojen je metod da se rastvore<br />

endogeni inhibitori 11β HSD - 11 β - hydroxysteroid<br />

dehydrogenaze iz urina. Uzorci<br />

folikularne te~nosti su stavljeni u C18 Seppak<br />

homatografske kertrid`e, iz kojih se<br />

jedinjenja rastu}e hidrofobnosti, jedno za<br />

drugim, ispiraju rastvorom sa rastu}om<br />

koncentracijom metanola. Svaki deo se<br />

potom testira da bi se videlo da li ima<br />

sposobnost da moduli{e bilo NADP + -<br />

nicotinamide adenine dinucleotide phosphate<br />

ili NADP - - nicotinamide adenine<br />

dinucleotide phosphate zavisnu oksidaciju<br />

kortizola pomo}u homogenata iz bubrega

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!