asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

378 Asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
Adultne stem }elije su nespecijalizovane
}elije sposobne da proizvode svoje identi-
~ne kopije i da se diferenciraju u specijalizovane
}elijske tipove tkiva iz kojih poti~u.
Nalazimo ih u ko{tanoj sr`i, krvi, kornei i
retini oka, mozgu, skeletnim mi{i}ima,
pulpi zuba, jetri, ko`i, pankreasu i du` gastrointestinalnog
trakta. Adultne stem }elije
su retke, te{ke za identifikovanje i izolaciju.
Novije studije pokazuju da one
imaju potencijal za produkciju {ireg
raspona }elijskih tipova uz ne{to ve}u
efikasnost. Tehnologija kultivacije adultnih
stem }elija susre}e se sa problemom njihove
umanjene proliferativne sposobnosti.
]elije gube sposobnost diferencijacije i
obrnuto. Su{tinski problemi su stepen
reprogramiranja jedra i odr`avanje stabilnog
kariotipa.
hESC - human embryonic stem cell
Nakon izolacije }elija ICM - inner cell
mass iz blastociste petog dana i njihove kultivacije
u posebnim uslovima, uspe{nom
proliferacijom istih, mogu se dobiti }elije
specifi~nih karakteristika, koje ih defini{u
kao ES - embryonic stem }elije:
- zadr`avaju sposobnost beskona~ne
proliferacije simetri~nim deobama bez diferencijacije
hESC - human embryonic stem cell,
- pokazuju i odr`avaju pun diploidan i
normalan komplement hromozoma, kariotip,
- zadr`avaju razvojni potencijal formiranja
izvedenih derivata sva tri klicina lista,
- klonogene su, pojedina~na ES - embryonic
stem }elija mo`e dati koloniju
geneti~ki identi~nih }elija sa zadr`anim
karakteristikama originalne }elije. Sve ES -
embryonic stem }elijske linije ne pokazuju
ovu osobinu,
- nemaju G1 fazu }elijskog ciklusa, ve-
}inu `ivota provode u S fazi sinteti{u}i
DNK - deoksiribonukleinsku kiselinu, regulisane
su unutra{njom signalizacijom i
spoljnim faktorima,
- ne pokazuju X inaktivaciju,
- pokazuju ekspresiju transkripcionog
faktora Oct-4 - octamer -4, klju~ni faktor za
odr`avanje proliferacije i nediferenciranog
stanja }elija i visok nivo alkalne fosfataze
- poseduju stalnu i visoku aktivnost telomeraze,
enzima koji odr`ava du`inu
telomera hromozoma. Relativno duge
telomere indikacija su sposobnosti za dugi
niz deoba,
- odlikuju ih slede}i povr{inski }elijski
markeri:
SSEA-1 izostaje
SSEA-3 prisutan
SSEA-4 prisutan
TRA-1-60 prisutan
TRA-1-81 prisutan.
Kultivacija ES - embryonic stem }elija
Embrionalne stem }elije su osetljive i
zahtevne u kulturi. Rast im je relativno spor
PDT - population doubling time od 36
~asova. Moraju se svakodnevno prihranjivati.
Medijum za kultivaciju je DMEM -
Dulbecco s modified Eagle s medium sa
20% seruma FCS - fetal calt serum i
dodacima, bez LIF - leukemia inhibitory
factor neophodnog za mESC - mouse
embryonic stem cell. U sudu za kulturu
neophodan je monosloj }elija tipa fibroblasta,
feeder cells koji podr`ava rast ES -
embryonic stem }elija. Pored toga {to je
neophodno prisustvo feeder cells, na
uspe{nost kulture uti~u i drugi, za sada
nepoznati faktori. Tokom kultivacije rastu i
razdeljuju se kao relativno spljo{tene i rastresite
kolonije, sve do uspostavljanja
besmrtne linije.