03.12.2012 Views

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

IV Deo: Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> 283<br />

10. VITRIFIKACIJA OOCITA, EMBRIONA I<br />

OVARIJALNOG TKIVA<br />

Vitrifikaciju mo`emo definisati kao<br />

solidifikaciju rastvora na niskim temperaturama,<br />

pomo}u ekstremnog porasta<br />

viskoziteta u toku hla|enja. Viskozitet<br />

uzorka raste dok molekuli ne postanu imobilni<br />

te uzorak nije vi{e te~an ve} dobija<br />

karakteristike ~vrstog. Tako je vitrifikacija<br />

rezultat velike brzine rashla|ivanja<br />

udru`ene sa visokom koncentracijom krioprotektanta.<br />

Voda se zamenjuje krioprotektantom.<br />

Postignuta brzina hla|enja kre}e se izme|u<br />

15000 i 30000 stepena /min, a voda se direktno<br />

transformi{e iz te~ne faze u tzv. staklastu,<br />

vitrificiranu fazu. Na ovaj na~in ne dolazi<br />

do formiranja kristala leda koji je jedan od<br />

glavnih uzroka o{te}enja }elije ili tkiva.<br />

Treba napomenti da se u procesu krioprezervacije<br />

koriste termini zamrzavanje i<br />

odmrzavanje, koji se u slu~aju metode vitrifikacije<br />

zamenjuju terminima vitrifikacija<br />

i zagrevanje.<br />

U slu~aju vitrifikacije osnovni problem<br />

le`i u visokim koncentracijama krioprotektanta<br />

koji je neophodan za odvijanje ovog<br />

procesa. Ne mogu se zaobi}i biolo{ka<br />

ograni~enja u odnosu na koncentraciju krioprotektanata<br />

koja mo`e da bude tolerisana<br />

od strane }elije. Stoga je osnovni cilj bilo kog<br />

protokola vitrifikacije pove}anje brzine<br />

smanjenja temperature uz istovremeno<br />

kori{}enje najni`ih mogu}ih koncentracija<br />

krioprotektanata.<br />

Puferovana medijumska baza koja se<br />

koristi za vitrifikaciju je ili fosfatni pufer<br />

rastvor ili Hepes pufer medijum za kulturu.<br />

Krioprotektanti<br />

Krioprotektanti su neophodni za krioprezervaciju<br />

}elija. Toksi~nost ovih agenasa<br />

je odlu~uju}i limitiraju}i faktor u kriobiologiji.<br />

Stoga, glavni cilj bilo kog protokola<br />

vitrifikacije mora da bude supresija toksi~nosti<br />

bez gubitka efikasnosti krioprotektivnog<br />

agenta. Postoje dva osnovna tipa<br />

krioprorektanata: permeabilni i nepermeabilni<br />

krioprotektanti. Naj~e{}e kori{}eni<br />

krioprotektanti su DMSO - dimethyl sulfoxide,<br />

glicerol i 1,2-propanediol. Naj~e{}i<br />

i najprihva}eniji krioprotektant za vitrifikaciju<br />

su acetamid i EG - ethylene glycol.<br />

Pokazalo se da ima zna~ajan toksi~ni<br />

efekat kao i veliku brzinu difuzije sa brzom<br />

ekvilibracijom unutar }elija kroz zonu pellucidu<br />

i }elijsku membranu. Uobi~ajena<br />

praksa u cilju redukovanja toksi~nosti, ali<br />

ne i efikasnosti krioprotektanta je da se<br />

}elija prvo izlo`i ni`im koncentracijama, a<br />

potom vi{im koncentracija krioprotektanata.<br />

Oni su obi~no viskozni, rastvorljivi u

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!