asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
II Deo: Humana reprodukcija 31<br />
Do nedavno je postojalo verovanje da<br />
aneuploidne ootide nastaju, uglavnom, kao<br />
posledica nerazdvajanja bivalenata u prvoj<br />
mejoti~koj deobi. Me|utim, nedavne studije<br />
nagovestile su da nerazdvajanje hromatida<br />
zna~ajno doprinosi ukupnom broju<br />
gre{aka u procesu mejoze, pokazuju}i zavisnost<br />
u~estalosti gre{aka od starosne dobi<br />
majke.<br />
Da bi se stekla kompletna slika u kom<br />
momentu se de{avaju gre{ke u mejozi<br />
veoma su bitne informacije o podudarnom<br />
setu hromozoma prvog polarnog tela PB1 -<br />
polar body. Naime, svaki poreme}aj u broju<br />
hromozoma sekundarnog oocita koji je<br />
nastao kao rezultat gre{ke u mejozi I mora<br />
biti pra}en odgovaraju}om aneuploidijom<br />
prvog polarnog tela. Zbog toga se analizom<br />
kariotipa PB1 indirektno dobijaju informacije<br />
o mogu}im aneuploidijama sekundarnog<br />
oocita. Novije studije su pokazale<br />
da hromozomi PB1 - polar body postaju<br />
prepoznatljivi i prebrojivi posle 2-3 ~asa u<br />
in vitro uslovima i tokom slede}ih 2 do 3<br />
~asa, sa degeneracijom koja sledi posle 6-7<br />
~asova nakon ekstruzije. Ipak, analiza kariotipa<br />
prvog polarnog tela, PB1, ~esto je<br />
veoma ote`ana zbog hromozomskog<br />
preklapanja.<br />
Kao pomo}no sredstvo u analizi kariotipa<br />
PB1 koristi se ~esto FISH - fluorescence<br />
in situ hybridization, metoda. Na osnovu<br />
FISH metode proverava se prisutnost broja<br />
hromatida za svaki konkretan hromozom.<br />
Za }elije koje nastaju na kraju mejoze I,<br />
kao {to su sekundarni oocit i prvo polarno<br />
telo, koje imaju haploidan broj hromozoma<br />
i kod kojih se svaki hromozom sastoji iz<br />
dve hromatide, broj signala, ta~aka, za<br />
odre|eni hromozom treba biti dva. Svako<br />
odstupanje od ovog broja, nedostatak<br />
jednog ili oba signala kao i vi{ak jednog ili<br />
oba signala govori o gre{ci koja se desila<br />
tokom mejoze. Za izvo|enje FISH metode<br />
koriste se specijalne DNK probe koje fluoresciraju<br />
i koje su specifi~ne za odre|eni<br />
hromozom. Ovom metodom proverava se<br />
prisutnost hromatida hromozoma za jedan<br />
ili vi{e hromozoma, pa se ne dobija uvid o<br />
eventualnim poreme}ajima kompletnog<br />
kariotipa. U prvim analizama hromozoma<br />
kori{}ene su fluoroscentne alfa-satelit<br />
DNK, sonde za hromozome 18 i X.<br />
Svi podaci koji su dobijeni analizom<br />
hromozoma PB1 klini~ki su primenjeni<br />
tako {to su kori{}eni za predselekciju oocita,<br />
koji nemaju aneuploidnosti, kod IVF -<br />
in vitro fertilisation starijih pacijenata.<br />
Iskustvo je pokazalo da su informacije o<br />
kariotipu PB1 ipak nedovoljne da bi se<br />
utvrdilo da ne postoji abnormalnost<br />
oplo|enog oocita. Precizne informacije<br />
mogu se dobiti tek kada se sa sigurno{}u<br />
utvrdi krajnji ishod druge mejoti~ke deobe,<br />
na osnovu analize kariotipa drugog<br />
polarnog tela PB2 - polar body.<br />
Sekvencijalno uklanjanje PB1 - polar<br />
body i PB2 - polar body se koristi za testiranje<br />
poreme}aja gena, PCR - polymerase<br />
chain reaction ili FISH - fluorescence in<br />
situ hybridization analizom.<br />
Biopsirani oociti se vra}aju u kulturu,<br />
posle provere postojanja deobe i obavlja se<br />
transfer u zavisnosti od genotipa oocita.<br />
Embrioni se transferi{u u implantacionom<br />
periodu.<br />
Kako se PB1 i PB2 izbacuju iz oocita<br />
tokom normalnog procesa sazrevanja, njihovo<br />
uklanjanje nema biolo{ku ulogu u<br />
razvoju embriona. Kompetentnost embriona<br />
se nije promenila nakon uklanjanja PB1.<br />
Studije koje su pratile rast i razvoj ovih<br />
embriona kroz implantacioni i postimplantacioni<br />
period kao i prate}e studije kod<br />
dece ro|ene nakon ove procedure, potvrdile<br />
su da nema {tetnih uticaja ove metode.
Change language