asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
284 Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> u <strong>humanoj</strong> <strong>reprodukciji</strong><br />
vodi i koriste se u visokim koncentracijama.<br />
Stepen penetracije zavisi od temperature<br />
i razlikova}e se zavisno od specifi~ne<br />
hemijske strukture i tipa }elije.<br />
Disaharidi<br />
Dodavanje {e}era: saharoze, fruktoze,<br />
glukoze, sorbitola, trehaloze ili rafimoze,<br />
krioprotektantu EG-ethylene glycol, baznom<br />
rastvoru za vitrifikaciju, menjaju se karakteristike<br />
ovog rastvora. Aditivi sa velikom<br />
molekularnom te`inom, kao {to su disaharidi,<br />
saharoza ili trehaloza, ne penetriraju<br />
}elijsku membranu, ali zna~ajno redukuju<br />
koli~inu neophodnog krioprotektanta kao i<br />
njegovu toksi~nost. Dodavanje nepermeabilne<br />
komponente soluciji za vitrifikaciju i<br />
inkubaciju }elije u ovom rastvoru, pre vitrifikacije,<br />
poma`e da se povu~e vi{e vode<br />
iz }elije i tako smanjuje vreme eksponiranja<br />
}elija toksi~nom efektu krioprotektanta.<br />
Nepermeabilna saharoza tako|e deluje i<br />
kao osmotski pufer u smislu redukovanja<br />
osmotskog soka.<br />
Makromolekuli<br />
]elije prirodno sadr`e visoke koncentracije<br />
proteina koji su od pomo}i u procesu<br />
vitrifikacije. Vi{e koncentracije krioprotektanata<br />
su potrebnije za ekstracelularnu<br />
nego za intracelularnu vitrifikaciju.<br />
Dodavanje polimera visoke molekularne<br />
te`ine kao {to je PVP - polyvinylpyrolidone,<br />
PEG - polyethylene glycol ili fricoli je<br />
dovoljno za vitrifikaciju ekstracelularnog<br />
dela sa koncentracijom krioprotektanta koji<br />
je dovoljan za intracelularnu vitrifikaciju.<br />
Pokazano je da u odre|enim uslovima<br />
polimeri mogu da redukuju Cv za 7% u<br />
proseku do 24% u kombinaciji sa<br />
pove}anim hidrostatskim pritiskom. [ta<br />
vi{e, polimeri mogu da stvore viskozni<br />
matriks za inkapsulaciju oocita/embriona i<br />
spre~e kristalizaciju u toku rashla|ivanja,<br />
odnosno zagrevanja.<br />
Intracelularni lipidi<br />
Nedavno su objavljeni rezultati o novoj<br />
metodi koja se sastoji u polarizaciji i uklanjanju<br />
citoplazmatskih lipida iz oocita i<br />
embriona pre vitrifikacije, ~ime se izbegava<br />
negativni efekat uzrokovan hla|enjem<br />
intracelularnih lipida. Bez obzira na prve<br />
objavljene rezultate, ne mo`e se a ne uzeti<br />
u obzir uloga intracelularnih lipida kao<br />
izvora energije za oocite, odnosno, kao<br />
gradivni materijal za }elijske membrane,<br />
mitohondrije i endoplazmatski retikulum.<br />
U obilju istra`ivanja koja se bave efektima<br />
rashla|ivanja, negativan kriouticaj je<br />
obja{njen i efektima na elemente citoskeleta.<br />
Negativni efekat rashla|ivanja se tako|e<br />
obja{njava depolimerizacijom mikrotubula<br />
i mikrofilamenata kod humanih oocita.<br />
Zamrzavanje i odmrzavanje oocita indukuje<br />
promene u fizi~ko-hemijskim svojstvima<br />
intracelularnih lipida. Poznato je da su oociti<br />
u drugoj metafazi rezistentniji na o{te}enja<br />
izazvana zamrzavanjem od oocita u GV -<br />
germinal vesicle stadijumu. To je verovatno<br />
uslovljeno razlikama u svojstvima citoskeletnih<br />
elemenata. Jedan od va`nih elemenata<br />
je razlika u konfiguraciji mikrotubula<br />
i mikrofilamenata u toku maturacije<br />
oocita. Elementi citoskeleta GV- germinal<br />
vesicle oocita su rigidni i pravi, dok su<br />
mikrofilamenti i mikrotubuli kod oocita u<br />
drugoj fazi mejoze fleksibilni i talasasti.<br />
Imaju}i u vidu hipotezu da je interakcija<br />
izme|u lipidne faze }elije i elemenata<br />
citoskeleta kompleksna, menjanje strukture<br />
lipida mo`e da uzrokuje deformaciju i<br />
prekid elemenata citoskeleta. U slu~ajevima<br />
rigidnog citoskeleta GV - germinal<br />
vesicle oocita o{te}enja su trajna.