03.12.2012 Views

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

284 Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> u <strong>humanoj</strong> <strong>reprodukciji</strong><br />

vodi i koriste se u visokim koncentracijama.<br />

Stepen penetracije zavisi od temperature<br />

i razlikova}e se zavisno od specifi~ne<br />

hemijske strukture i tipa }elije.<br />

Disaharidi<br />

Dodavanje {e}era: saharoze, fruktoze,<br />

glukoze, sorbitola, trehaloze ili rafimoze,<br />

krioprotektantu EG-ethylene glycol, baznom<br />

rastvoru za vitrifikaciju, menjaju se karakteristike<br />

ovog rastvora. Aditivi sa velikom<br />

molekularnom te`inom, kao {to su disaharidi,<br />

saharoza ili trehaloza, ne penetriraju<br />

}elijsku membranu, ali zna~ajno redukuju<br />

koli~inu neophodnog krioprotektanta kao i<br />

njegovu toksi~nost. Dodavanje nepermeabilne<br />

komponente soluciji za vitrifikaciju i<br />

inkubaciju }elije u ovom rastvoru, pre vitrifikacije,<br />

poma`e da se povu~e vi{e vode<br />

iz }elije i tako smanjuje vreme eksponiranja<br />

}elija toksi~nom efektu krioprotektanta.<br />

Nepermeabilna saharoza tako|e deluje i<br />

kao osmotski pufer u smislu redukovanja<br />

osmotskog soka.<br />

Makromolekuli<br />

]elije prirodno sadr`e visoke koncentracije<br />

proteina koji su od pomo}i u procesu<br />

vitrifikacije. Vi{e koncentracije krioprotektanata<br />

su potrebnije za ekstracelularnu<br />

nego za intracelularnu vitrifikaciju.<br />

Dodavanje polimera visoke molekularne<br />

te`ine kao {to je PVP - polyvinylpyrolidone,<br />

PEG - polyethylene glycol ili fricoli je<br />

dovoljno za vitrifikaciju ekstracelularnog<br />

dela sa koncentracijom krioprotektanta koji<br />

je dovoljan za intracelularnu vitrifikaciju.<br />

Pokazano je da u odre|enim uslovima<br />

polimeri mogu da redukuju Cv za 7% u<br />

proseku do 24% u kombinaciji sa<br />

pove}anim hidrostatskim pritiskom. [ta<br />

vi{e, polimeri mogu da stvore viskozni<br />

matriks za inkapsulaciju oocita/embriona i<br />

spre~e kristalizaciju u toku rashla|ivanja,<br />

odnosno zagrevanja.<br />

Intracelularni lipidi<br />

Nedavno su objavljeni rezultati o novoj<br />

metodi koja se sastoji u polarizaciji i uklanjanju<br />

citoplazmatskih lipida iz oocita i<br />

embriona pre vitrifikacije, ~ime se izbegava<br />

negativni efekat uzrokovan hla|enjem<br />

intracelularnih lipida. Bez obzira na prve<br />

objavljene rezultate, ne mo`e se a ne uzeti<br />

u obzir uloga intracelularnih lipida kao<br />

izvora energije za oocite, odnosno, kao<br />

gradivni materijal za }elijske membrane,<br />

mitohondrije i endoplazmatski retikulum.<br />

U obilju istra`ivanja koja se bave efektima<br />

rashla|ivanja, negativan kriouticaj je<br />

obja{njen i efektima na elemente citoskeleta.<br />

Negativni efekat rashla|ivanja se tako|e<br />

obja{njava depolimerizacijom mikrotubula<br />

i mikrofilamenata kod humanih oocita.<br />

Zamrzavanje i odmrzavanje oocita indukuje<br />

promene u fizi~ko-hemijskim svojstvima<br />

intracelularnih lipida. Poznato je da su oociti<br />

u drugoj metafazi rezistentniji na o{te}enja<br />

izazvana zamrzavanjem od oocita u GV -<br />

germinal vesicle stadijumu. To je verovatno<br />

uslovljeno razlikama u svojstvima citoskeletnih<br />

elemenata. Jedan od va`nih elemenata<br />

je razlika u konfiguraciji mikrotubula<br />

i mikrofilamenata u toku maturacije<br />

oocita. Elementi citoskeleta GV- germinal<br />

vesicle oocita su rigidni i pravi, dok su<br />

mikrofilamenti i mikrotubuli kod oocita u<br />

drugoj fazi mejoze fleksibilni i talasasti.<br />

Imaju}i u vidu hipotezu da je interakcija<br />

izme|u lipidne faze }elije i elemenata<br />

citoskeleta kompleksna, menjanje strukture<br />

lipida mo`e da uzrokuje deformaciju i<br />

prekid elemenata citoskeleta. U slu~ajevima<br />

rigidnog citoskeleta GV - germinal<br />

vesicle oocita o{te}enja su trajna.

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!