03.12.2012 Views

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

asistirana reproduktivna tehnologija u humanoj reprodukciji

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

IV Deo: Asistirana <strong>reproduktivna</strong> <strong>tehnologija</strong> 277<br />

9. KONVENCIONALNA KRIOPREZERVACIJA<br />

OOCITA, EMBRIONA I OVARIJALNOG TKIVA<br />

Uvo|enjem metode krioprezervacije u<br />

IVF - in vitro fertilisation postupak<br />

pove}ane su {anse za ostvarivanje trudno}e<br />

iz svakog pojedina~nog postupka.<br />

U Australiji, Alan Trounson i Linda<br />

Mohr prvi objavljuju uspe{nu trudno}u<br />

nakon transfera krioprezervisanog embriona<br />

kod ljudi 1983. godine.<br />

Krioprezervacija podrazumeva rashla-<br />

|ivanje `ivih }elija u cilju stavljanja `ivotnih<br />

procesa u poziciju stand by.<br />

Najkriti~niji momenat za }elije u toku<br />

procesa zamrzavanja i odmrzavanja je tzv.<br />

intermedijarna temperaturna zona od -15<br />

do -60 stepeni Celzijusa. U toku konvencionalne<br />

krioprezervacije, jo{ poznate i kao<br />

slow freezing ili equilibrium freezing,<br />

ekvilibrijum se posti`e sa relativno niskim<br />

koncentracijama krioprotektanata oko 1,5 M,<br />

a dehidratacija se odigrava u toku sporog<br />

procesa hla|enja od 0,3 do 2 stepena<br />

Celzijusa/min. Ukoliko je rashla|ivanje<br />

dovoljno sporo, voda se uklanja iz }elija<br />

delovanjem krioprotektanta, ~ime se izbegava<br />

letalna intracelularna kristalizacija.<br />

Mogu se koristiti i permeabilni i nepermeabilni<br />

krioprotektanti. Biolo{ki materjal se<br />

deponuje na temperaturi od -196 stepeni<br />

Celzijusa u te~nom azotu.<br />

U toku procesa odmrzavanja mo`e da<br />

do|e do stvaranja intracelularnih kristala<br />

leda, {to se izbegava brzim zagrevanjem.<br />

Najva`niji limitiraju}i faktor pri sporom<br />

rashla|ivanju je brzina kojom voda i krioprotektantni<br />

prolaze }elijsku membranu.<br />

Ovo zavisi od gra|e }elijske membrane,<br />

temperaturno zavisne permeabilnosti }elijske<br />

membrane za vodu i krioprotektante<br />

kao i povr{insko/zapreminskog odnosa.<br />

Osmotske promene izazvane dehidratacijom<br />

imaju za posledicu pove}anje<br />

unutra{nje koncentracije soli koja negativno<br />

uti~e na vitalne procese u }eliji. Pad<br />

temperature u toku krioprezervacije ima<br />

direktan efekat na biohemiju }elije. Na<br />

svakih 10 stepeni smanjenja temperature,<br />

registruje se 50% smanjenja biohemijske<br />

aktivnosti }elije. Na nivou }elije, ovaj temperaturni<br />

fenomen primarno deluje na }elijski<br />

metabolizam i proteine u citoplazmi,<br />

koja je okru`ena plazma membranom i sastavljena<br />

od bioaktivnih proteina izme|u<br />

lipidnih slojeva. Tako odre|ene enzimske<br />

reakcije za koje je na temperaturi od 27 stepeni<br />

potrebna 1 sec, na temperaturi te~nog<br />

azota od - 196 stepeni traju 2 miliona godina.<br />

Protokoli krioprezervacije sastoje se u<br />

laganom eliminisanju frizibilne vode.

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!