UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID - Biblioteca de la ...

Material y Métodos
Una vez evaporado se pesa el matraz y por diferencia de pesada en vacío se
calcula la cantidad de grasa extraída.
Las muestras así obtenidas son transvasadas a tubos herméticos con
tapón de rosca y junta de teflón, y se pasan por una corriente de nitrógeno para
asegurar condiciones anaerobias para su conservación. Se congelan a -25ºC
para su posterior análisis.
4.2.2. FORMACIÓN DE ÉSTERES METÍLICOS
Se realiza siguiendo la metodología del trifluoruro de boro (BF3) de
Morrison y Smith (1964). El alcoholato de trifluoruro de cloro se comporta como
un ácido fuerte (Topchiev et al., 1959) y por tanto promueve la metanolísis de
los lípidos de una manera similar al HCL o H2SO4 en metanol, con las ventajas
añadidas conferidas por la extrema electropolaridad del trifluoruro de boro.
Mediante la catálisis ácida no sólo se transesterifican los triglicéridos y otros
complejos lipídicos, sino también se esterifican los ácidos grasos libres en
presencia de metanol (Ke-Shun, 1994).
Se toman 20 mg de la grasa extraída en un tubo con tapón de rosca y
junta de teflón, se le añade 1 ml de patrón interno (1µg/µl de ácido
nonadecanoico (C19:0), en cloroformo- N5252 de Sigma), evaporándose hasta
sequedad bajo corriente de nitrógeno, en un concentrador de muestras. Se
añade 1 ml de potasa (KOH) en metanol 0.5N y 1 ml de trifluoruro de boro
(BF3) en metanol. Este reactivo reacciona para formar éter dimetílico (Topchiev
et al., 1959), el cual no interfiere con el análisis de los ésteres metílicos.
Se agitan los tubos y se llevan a la estufa durante una hora a 100ºC. La
reacción del alcali con el BF3 es fuertemente exotérmica y podría ocurrir una
saponificación de los ésteres metílicos si la mezcla no se enfría. Así se dejan
enfriar los tubos y se añaden 2 ml de agua salina al 10% y 2 ml de hexano, se
agitan y se dejan reposar la separación de fases. Se toma una alícuota de 1 ml
de la fase superior (hexano), llevándose hasta 10 ml con hexano. La solución
se transfiere a un vial de 2.5 ml (Perkin Elmer Nº N930-1385), y se sella
herméticamente con un tapón de junta de teflón. Esta dilución así preparada
está dispuesta para la inyección cromatográfica.
113