Periodoncia.Eley.6a.Ed

Pruebas diagnósticas de actividad de la enfermedad periodontal 183
Se ha demostrado que el número de espiroquetas y bacterias móviles predice
la pérdida de inserción periodontal futura, en la observación prospectiva
durante 1 año de pacientes bajo mantenimiento después del tratamiento
periodontal, cuando no se realiza ningún tratamiento durante el período en el
que se realizó el test (Listgarten y Levin, 1981). Sin embargo, no se encontró
valor predictivo cuando los pacientes fueron sometidos a raspado cada 3
meses durante un estudio de 3 años (Listgarten et al., 1986). Además, cuando
A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis y Prevotella intermedia fueron probados
como predictores de pérdida de inserción periodontal futura en un
estudio similar durante 3 años con pacientes bajo mantenimiento regular, no
se demostró ningún potencial diagnóstico (Listgarten et al., 1991).
El número de especies bacterianas se puede determinar de diversas formas
(Listgarten, 1992), entre ellas las que escribimos a continuación.
Microscopia de campo oscuro o con contraste de fase
La ventaja principal de estas técnicas es la capacidad de contar todas las bacterias
presentes en la muestra. El inconveniente principal radica en la incapacidad
de determinar la especie de los microorganismos. Sin embargo, los
estudios que han utilizado estas técnicas han demostrado que en la encía sana
existe una flora subgingival normal de cocos y bacilos no móviles, mientras
que en la gingivitis aparecen bacilos móviles y espiroquetas y en la periodontitis
aumentan mucho esos morfotipos, en particular las espiroquetas
(Listgarten y Levin, 1981; Listgarten, 1986).
Técnicas de cultivo
Esas técnicas son capaces de analizar la naturaleza de los microorganismos
presentes en una muestra, puesto que se pueden determinar las especies con
diversos métodos de laboratorio, entre ellos subcultivos selectivos, pruebas
bioquímicas, SDS PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida), sondas
genéticas, ribotipación, huella digital de ADN y análisis de los ácidos grasos
de cadena larga de la pared celular (Genco et al., 1986; Greenstein, 1988). Sin
embargo, no todas las bacterias se pueden cultivar con facilidad y no es probable
que la obtención proporcional de especies cultivables sea similar a sus
proporciones en la bolsa periodontal. Además, el empleo de medios selectivos
limitará las especies que pueden proliferar (Mandell y Socransky, 1981).
Análisis inmunológicos
El uso de técnicas inmunológicas como la inmunofluorescencia (Zambon et al.,
1985b; Zambon et al., 1986) o el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas
(ELISA) (Ebersole et al., 1984) permite detectar especies bacterianas individuales.
Esos métodos se han mostrado útiles para detectar la presencia y las proporciones
relativas de especies bacterianas seleccionadas. Estas técnicas emplean
anticuerpos específicos que se unen a antígenos bacterianos seleccionados y son
detectados después mediante marcado de los anticuerpos primarios directamente
con un marcador fluorescente (inmunofluorescencia directa) (fig. 14.2A)
o con un anticuerpo secundario fluorescente (inmunofluorescencia indirecta)
Fig. 14.2 El esquema muestra las bases de: (arriba)
inmunofluorescencia directa, (centro) ensayos por
inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) (izquierda);
ELISA indirecto (centro); con anticuerpo terciario o detector
(derecha) y (abajo) inmunofluorescencia indirecta utilizando
un anticuerpo secundario. En las técnicas ELISA, el anticuerpo
detector es ligado a una enzima, usualmente peroxidasa del
rábano o fosfatasa alcalina, que cataliza una reacción en
cadena generadora del color.
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