Сборник 69 конференции ВолгГМУ 27-30 апреля 2011

69-я открытая научно-практическая конференция молодых ученых и студентов с международным участиемУДК 576.851.132:616.982.27-033 К-69Т. В. БулатоваСВОЙСТВА ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛК ГЛИКОПРОТЕИНУ 200 KDA BURKHOLDERIA PSEUDOMALLEIНИПЧИ Роспотребнадзора, г. ВолгоградНаучный руководитель: д.м.н., профессор Н. П. ХраповаВведение. Известно, что выявление вирулентныхштаммов возбудителя мелиоидоза, атакже его дифференциация от близкородственныхмикроорганизмов, связана с присутствием вкапсуле бактерий гликопротеина с м. м. 200 kDa[3].В связи с этим, сформировалось одно изперспективных направлений совершенствованиялабораторной диагностики мелиоидоза: получениемоноклональных антител (МКА) к антигену200 kDa и создание на их основе иммунодиагностическихпрепаратов для обнаружения и идентификациивирулентных штаммов B. pseudomallei[2].Целью настоящей работы являлось изготовлениеобразцов иммуноглобулинов флуоресцирующихмелиоидозных на основе МКА к гликопротеину200 kDa и оценка параметров их качества.Материалы и методы. Для достиженияцели были получены препаративные количествамоноклональных антител к гликопротеину 200kDa возбудителя мелиоидоза, продуцируемыхгибридомами из коллекции лаборатории иммунодиагностикии биотехнологии ВолгоградНИП-ЧИ Роспотребнадзора.Накопление 6 вариантов МКА различнойэпитопной направленности проводили in vivo пометодике внутрибрюшинного прививания клетокгибридом линейным мышам BALB/c для полученияасцитических жидкостей (АЖ), содержащихцелевой продукт. Относительные показателипрививаемости гибридом in vivo соответствоваливысокому уровню (от 67 до 100%), а объёмы полученныхАЖ имели средние показатели асцитообразования(от 2,4 до 4,0 мл).Из полученных АЖ изолировали иммуноглобулиновуюфракцию методом трёхкратногопереосаждения белка в растворе сульфата аммония.После очистки МКА был выполнен этапконтроля гомогенности полученных образцовиммуноглобулинов в РИД с антивидовой кроличьейсывороткой к иммуноглобулинам мыши.Затем в непрямом МФА были получены доказательствавзаимодействия подготовленных дляпоследующих этапов работы вариантов МКА сэпитопами, экспонированными на поверхностимикробных клеток B. pseudomallei.Индивидуальные образцы МКА метилифлуоресцеин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ) [1]. Данныео свойствах приготовленных коньюгатовМКА-ФИТЦ представлены в таблице 1.Наименование МКАТаблица № 1. Параметры качества коньюгатов (МКА-ФИТЦ)Концентрация белка(мг/мл)Молярное соотношениеФИТЦ/белокРабочее разведение *3C 6 /A 7 2,13 8,7 1/324A 10 /A 7 7,0 4,2 1/325C 2 /F 10 3,9 4,22 1/325C 9 /E 11 4,0 8,78 1/326A 11 /G 12 7,4 6,96 1/646B 7 /H 12 1,64 8,15 1/8* - определено по результатам МФА с использованием мазков-препаратов высоко- вирулентного штаммаBurkholderia pseudomallei 100Препараты иммуноглобулинов флуоресцирующихмоноклональных были проверены вМФА. Пять образцов препаратов обладали высокимипоказателями активности в отношении гомологичногоштамма B. pseudomallei 100, чтосвидетельствовало о высокой плотности эпитопов,гомологичных каждому из использованныхдля их приготовления МКА, экспрессированныхна поверхности данного штамма.Выводы.Таким образом, в результате проделаннойработы подтверждена высокая специфическаяактивность использованных МКА и получены доказательстваих пригодности для изготовленияпрепаратов для метода флуоресцирующих антител.Литература1. Отчёт о НИР (заключит.) / Волгогр. науч.-исслед. противочум. ин-т.-Волгоград, 1997.-№ ГР 01.9.50. 001333 – 73 с.167