Сборник 69 конференции ВолгГМУ 27-30 апреля 2011

«Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» – Волгоград, 27-30 апреля 2011 г.Литература1. Dominguez-Gerpe L., Rey-Mendez M. Alterationsinduced by chronic stress in lymphocytesubsets of blood and primary and secondaryimmune organs of mice // BMC Immunol.- 2001.-Vol.2.- N1.- C.7-17.УДК 611-018.8И. А. Рудченко, О. С. ДмитриеваСПОСОБ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ОКРАСКИ НЕРВНОЙ ТКАНИВолгоградский государственный медицинский университет,Российский государственный медицинский университет им. Н.И. ПироговаНаучный руководитель: асс. кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии, к.м.н. В.Л. ЗагребинВведение. В настоящее время существуетмножество методик выявления миелиновыхкомпонентов нервной ткани, однако процедураокраски гистологических препаратов трудоемка ииногда требует специальных реактивов и подготовкиперсонала для работы с ними. Некоторыеметоды применимы только для препаратов, приготовленныхна замораживающем микротоме.Цель: разработать и апробировать методикуэкспресс-окраски миелиновых волоконнервной ткани для парафиновых срезов.Материалы и методы. За основу разрабатываемойтехнологии взята методика выявлениямиелиновой оболочки по Шпильмейеру,предназначенная для элективного окрашиваниямиелиновых оболочек нервных волокон препаратов,полученных на замораживающем микротоме.Одновременно в белом веществе выявляетсядренажная олигодендроглия.Гистологический препарат изготавливаютпо стандартной методике с фиксацией 10% забуференнымформалином, дегидратацией в батарееспиртов по восходящей концентрации,просветлением хлороформом с заключением впарафиновый блок. Срезы изготавливаются насанном или ротационном микротоме толщиной10 мкм (для мозговых структур).Предлагаемый способ окраски:1. Срезы переносят на предметное стекло, смазанноебелком с глицерином, просушиваютфильтровальной бумагой.2. Подвергают депарафинизации в хлороформе.3. Проводят регидратацию в батарее спиртов понисходящей концентрации, промывая в 3 сменахдистиллированной воды.4. Погружают в 2,5 % раствор железоаммонийныхквасцов на 1 сутки и держат в темном месте.5. Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.6. Помещают в гематоксилин Бёмера на 15 минути держат на свету.7. Промывают в дистиллированной воде и микроскопируютв 25% растворе железоаммонийныхквасцов.8. Высушивают и заключают в бальзам.Результаты и их обсуждение. Микроскопированиепри экспозиции в растворе железоаммонийныхквасцов выявляет на светложелтомфоне миелиновые волокна темно-серогооттенка; тела нейронов, ядра дренажной олигодендроглиив белом веществе насыщенногофиолетового цвета. После высушивания передзаключением в бальзам цвет в отсутствие железоаммонийныхквасцов немного тускнеет. Предлагаемыйнами способ существенно экономитвремя – 27 часов против 72 часов гистологическойпроводки для элективного окрашивания парафиновыхсрезов гистологических препаратовмиелиновых оболочек нервных волокон поШпильмейеру, приготовленных рутинным методомвместо препаратов, изготавливаемых на замораживающеммикротоме. Данный способ позволяетсущественно снизить экономические затратына реактивы и оборудование.Выводы. Разработанный способ выявлениямиелиновых компонентов нервной тканидля парафиновых гистологических срезов экономическивыгоден, отличается быстротой исполненияи может использоваться во всех клиническихи научных лабораториях в отличие от способаокраски по Шпильмейеру для замороженныхсрезов, приготовление которых требует специальногодорогостоящего оборудования, опасныхреактивов (жидкий азот) и специально обученногоперсонала.252