Сборник 69 конференции ВолгГМУ 27-30 апреля 2011

69-я открытая научно-практическая конференция молодых ученых и студентов с международным участиемРАБОТЫ ШКОЛЬНИКОВУДК 616-018:616-003.24:616.411С. С. Никитенко, А. А. Максимов, К. И. Голенева, Е. А. РодионоваОСОБЕННОСТИ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОВОДКИ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВНА ПРИМЕРЕ СЕЛЕЗЕНКИВолгоградский государственный медицинский университет,кафедра гистологии, эмбриологии, цитологииНаучный руководитель: асс. И. Л. ДемидовичВведение. При микроскопическом исследованиилимфоидных тканей и органов большоезначение имеют техника взятия материала и проведениепоследующих этапов гистологическойпроводки. Имеются некоторые особенности приизготовлении препаратов лимфоидных органовиз-за их особой тканевой структуры.Цель исследования. Определить особенностипроведения этапов гистологическойпроводки при изготовлении препаратов селезенкикрыс.Материалы и методы. Исследованиябыли выполнены на 6 половозрелых белых крысах-самцах.Масса животных варьировала в пределахот 170 до 250г. Экспериментальные животныебыли поделены на 2 группы. У крыс группы№2 была удалена селезенка с применением специальногоприема: иссечение селезенки проводилосьс захватыванием капсулы (это необходимоеусловие для более нежной фиксации). У крыс 1-ойгруппы селезенка была удалена и сразу порезанана кусочки 0,5 – 1 см. Исследование осуществлялосьв шести полях зрения каждой селезенки крысы.Фиксация проводилась в формалине безпредварительного промывания в воде. Объемфиксирующей жидкости превосходил объем фиксирующегоматериала в 30 раз при комнатнойтемпературе, в течение 24 часов. Формалин(формол) - это производное 40% кислого формальдегида.Сначала, последний, нейтрализуютмелом (настаивая на углекислом кальции – Са-СОз, 100г. мела на 1000мл неразведенного формальдегида),а после разводят водой до получения12% раствора формалина. Фиксация сохраняетструктуру клеток, тканей и органов, предотвращаетих бактериальное загрязнение и ферментноепереваривание, стабилизируют макромолекулыпутем химического их сшивания. Подвлиянием фиксаторов ткани могут набухать илисжиматься (у нас наблюдалось – последнее) и этоявление сопровождается уплотнением тканей.Промывка материала проводилась подпроточной водой в течение 8 часов.Обезвоживание (дегидратация) в спиртахносит подготовительный характер для будущегопропитывания парафином. Однако парафин нерастворяется в спирту и обезвоженные спиртомкусочки требуют дополнительной обработки веществом,который, с одной стороны, обладаетспособностью смешиваться со спиртом, а с другой– является хорошим растворителем парафина.К такого рода веществам относятся: ксилол (1группа ), хлороформ (2 группа). Спирт, как обезвоживающеесредство, использовался в повышающихсяконцентрациях от 70% до 100%. Целую,инкапсулированную селезенку и селезенку,порезанную кусочками, помещали в первую емкость– 70% спирт на 24 часа; затем во 2-ю – 96%спирт на 24 часа; в 3-ю – 96% спирт на 24 часа, в4-ю –100% спирт на 2 часа.Парафин представляет собой плотнуюмассу, состоящую из смеси высокомолекулярныхпредельных углеводородов, стойкую по отношениюк щелочам и кислотам. Получают парафинкак путем очистки озокерита (земляной воск), таки перегонкой из разных сортов нефти, бурых углей,торфа, сланцев. Очищенный парафин не обладаетни запахом, ни вкусом; растворяется вхлороформе, ксилоле. Различные сорта парафинаплавятся при температуре от 27 до 62 градусов;плавящиеся ниже 50 градусов называютсямягкими парафинами, а выше этой температуры –твердыми. В зависимости от условий охлажденияпарафин может иметь вид либо грубокристаллическойбелой массы (Парафин-1), либо- полупрозрачнойаморфной - гомогенной (Парафин-2).Фиксированные селезенки животных 2-ойгруппы только после обезвоживания разрезали накусочки 0,5 – 1см. и помещали в хлороформ на6часов, а кусочки селезенки животных 1-ой группы,разрезанные перед фиксацией, помещали вксилол на 3 часа. Для постепенного и лучшегопропитывания парафином кусочки селезенки изхлороформа переносили в расплавленную смесьхлороформа с парафином и оставляли в термостатепри температуре 38 градусов на 2 часа. Приработе с ксилолом кусочки органов переносили всмесь ксилола с парафином на 2 часа при температуре38 градусов. Смесь хлороформа/ксилола спарафином готовили из равных объемных частейпросветлителя и парафина, для чего парафинпредварительно растапливали. Дальше материалдважды заливали разным по структуре парафином.Первая заливка была произведена Парафином-1на 2 часа в термостате при температуре 64градуса. Вторая – производилась Парафином – 2на 2 часа при температуре в термостате 64 граду-261