Сборник 69 конференции ВолгГМУ 27-30 апреля 2011

69-я открытая научно-практическая конференция молодых ученых и студентов с международным участиемпациентов и более 6 только 5 – 12,5%. Всем пациентамбыло предложено санаторно-курортноелечение после окончания стационарного этапа,проведено 39 пациентам, 1 отказался. После основногокурса химиотерапии положительная динамикадостигнута у 37 пациентов (92,5%), которыепо истечению года наблюдения были переведеныв III группу диспансерного учета, 1 пациентумер от острого инфаркта миокарда, у 2 другихбыло отмечено прогрессирование туберкулезногопроцесса.Выводы: данное исследование показало,что медико-социальный статус больных сэкссудативным плевритом туберкулезной этиологиисхожий с медико-социальным статусомбольных с туберкулезом легких. Сроки леченияэкссудативного плеврита значительно меньше посравнению с другими локализациями туберкулезногопроцесса. Эффективность лечения даннойформы туберкулеза в стационарных условияхдостаточна высока.Литература1. Перельман М.И. Фтизиатрия. Национальноеруководство, М.2007.УДК 616.928.6М. Л. Леденева, И. М. ШпакВНУТРИВИДОВОЕ ТИПИРОВАНИЕ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ГИСТОПЛАЗМОЗАМЕТОДОМ АМПЛИФИКАЦИИ С ПРОИЗВОЛЬНЫМИ ПРАЙМЕРАМИВолгоградский государственный медицинский университет,кафедра молекулярной биологии и генетикиНаучный руководитель: к.м.н. Г. А. ТкаченкоВведение. Histoplasma capsulatum являетсявозбудителем особо опасного глубокого микозачеловека и животных – гистоплазмоза.Идентификация возбудителя и внутривидоваядифференциация штаммов этого микромицетаявляется необходимым условием для расшифровкивспышек заболевания. Одним из молекулярно-генетическихметодов внутривидового типированияштаммов возбудителя гистоплазмозаявляется полимеразная цепная реакция с произвольнымипраймерами (RAPD – Randomly AmplifiedPolymorphic DNA).Цель исследования. Оценить возможностьиспользования RAPD-анализа для генотипированияколлекционных штаммов H. capsulatum.Задачи исследования: 1) оптимизироватьосновные этапы проведения реакции амплификациис произвольными праймерами дляэффективной и воспроизводимой дифференциацииштаммов H. capsulatum; 2) провести сравнительныйанализ RAPD-профилей, полученных сиспользованием одного и двух произвольныхпраймеров; 3) определить эффективность примененияметода RAPD для внутривидовой дифференциацииштаммов возбудителя гистоплазмоза.Материалы и методы. В работе использовали20 штаммов коллекционного центра живыхкультур ВолгоградНИПЧИ, представленныхтремя основными разновидностями: H. capsulatumvar. capsulatum, H. capsulatum var. duboisii иH.capsulatum var. farciminosum. ДНК выделяли изклеток мицелиальной формы после предварительноговоздействия хитиназы методом гуанидин-фенольнойэкстракции с переосаждениемДНК изопропанолом [1]. Для RAPD-типированияиспользовали произвольные праймеры 1281,1283, 1253 с содержанием G+C 60-70% [2]. Амплификациюпроводили на мультициклере''Терцик'' (''ДНК-Технология'', Россия). Последовательностиамплифицировали по программе:предварительный прогрев 94°C – 7 мин, 45 циклов(94°C – 30 с, 35°C – 30 с, 72°C – 60 с), финальнаяэлонгация 72°C – 5 мин. Продукты реакциианализировали в 3% агарозном геле. Кластерныйанализ RAPD-паттернов осуществлялина основе коэффициента генетической дистанцииM. Nei и W.H. Li с помощью программы Tree-Con for Windows v.1.3b. Группирование штаммовпроводили невзвешенным парно-групповым методом(UPGMA – Unweighted Pair Group Methodwith Arithmetic Mean).Результаты и обсуждение. Для дифференциацииштаммов H. capsulatum в реакции амплификациинами было проанализировано 3различных праймера и их сочетания. При анализепродуктов RAPD-реакции, полученных с использованиемпраймера 1283, в зависимости отштаммов, зарегистрировано от 3 до 6 фрагментовДНК размером от 151 до 1206 п.н. Комбинированиепраймера 1283 с двумя другими праймерамипозволило визуализировать большееколичество фрагментов, при уменьшении ихсреднего размера. Так, амплификация с праймерами1283 и 1281 выявила от 4 до 9 фрагментовразмером от 44 до 744 п.н.; с праймерами 1283 и1253 – от 4 до 9 фрагментов размером от 48 до713 п.н.; с праймерами 1281 и 1253 – от 6 до 11фрагментов размером от 53 до 1010 п.н.По результатам кластерного анализа RAPDпаттернов,полученных с использованием прай-173