2º Congreso Argentino De Fitopatología Libro de Resúmenes

2 º Congreso Argentino de Fitopatología
DIAGNÓSTICO DE Xylella fastidiosa, CAUSANTE DE LA
CLOROSIS VARIEGADA DE LOS CITRUS (CVC) POR PCR
CONVENCIONAL Y qPCR
R.M. Haelterman 1 , P.A. Tolocka 1 , S.F. Nome 1 y B.I. Canteros 2 . 1 IFFIVE
INTA. Camino 60 cuadras km 51/2, Córdoba. 2: EEA INTA Bella Vista,
Corrientes. rhaelt@correo.inta.gov.ar
Xylella fastidiosa es una bacteria que vive en el xilema de numerosos
hospedantes. En nuestro país se la encontró en prunoideas (ciruelos y
almendros) y en cítricos. En este último hospedante causa la clorosis
variegada de los citrus (CVC), ocasionando síntomas tales como:
clorosis internerval asimétrica en las hojas, con puntos necróticos que
se observan en la cara abaxial, caída de hojas y frutos pequeños con
cáscara dura. Si bien su diagnóstico se puede realizar con técnicas
serológicas, cuando la concentración bacteriana es baja, es necesario
contar con pruebas más sensibles para confirmar su presencia. Se
puso a punto las técnicas de cPCR y qPCR con primers HL5- HL6
(Francis et al, 2006) específicos para la detección de X. fastidiosa en
cítricos, almendro, vid y laurel de adorno, que amplifican un segmento
de 221 pb. Se utilizaron plantas con síntomas de CVC y sanas, de
Bella Vista, extrayendo el DNA con el kit Qiagen. Para el cPCR se
siguió el protocolo original, mientras que para qPCR, realizado con
los mismos primers y con sistema TaqMan, se adaptó el protocolo
de corrida a 95ºC 10seg y 60ºC 15seg. durante 40 ciclos. Se utilizó
1ul de DNA y diluciones seriadas de planta enferma 1/10 y 1/100.
Ambas técnicas identificaron solamente las plantas enfermas. En el
cPCR se obtuvo la banda esperada de 221 pb. detectándolas hasta
la dilución 1/100. En qPCR, las plantas enfermas tuvieron un ciclo
umbral (threshold cycle, ct) entre 20-25, mientras que los valores de
las diluciones anteriormente mencionadas variaron entre 28 y 35.
172