2º Congreso Argentino De Fitopatología Libro de Resúmenes

EVALUACIÓN DEL GEN DE UBIQUITINA COMO
CONTROL INTERNO DE qPCR EN Delphacodes kuscheli
INFECTADOS CON Mal de Río Cuarto Virus
E.B. Argüello Caro 1 , G.A. Maroniche 2 , M.F. Mattio 1 , M. del Vas 2 y G. Truol 1 .
1 IFFIVE- INTA. Córdoba, 2 Instituto de Biotecnología-CICVyA-INTA. Buenos
Aires. Argentina. eviarguello@hotmail.com
Delphacodes kuscheli es el principal vector del Mal de Río Cuarto Virus
(MRCV) en Argentina. En patosistemas similares se ha observado
mediante estudios de qPCR, que existe una relación positiva entre
la acumulación del virus en el vector y la eficiencia de transmisión.
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la utilidad del gen de la
ubiquitina (UBI) como control interno para estudios de cuantificación
de MRCV en D. kuscheli. Se procedió a la extracción individual
de RNA total y síntesis de cDNA de 30 ejemplares de D. kuscheli
alimentados durante 24 hs en una planta infectada y luego de 17 días
de latencia. Para cada muestra se amplificaron en paralelo, UBI y una
porción del segmento 3 del genoma del MRCV (MRCV-S3) por qPCR.
Cada reacción se realizó por triplicado a partir de 1 ul del cDNA y 200
nM de cada oligonucleótido en un volumen final de reacción de 20 ul
(QuantiTec SYBR Green). Se analizó la correlación entre la expresión
de UBI y MRCV-S3 aplicando el coeficiente de Spearman. No se halló
correlación lineal entre ambas variables (Spearman=0,032 y P=0,81)
dado que los valores de Ct de UBI se mantuvieron en un estrecho
rango (Ct: 21,9-23,6 ± 1,88) aun cuando el MRCV-S3 presentó amplia
variación (muestras negativas a Ct: 15,8-37,6 ± 9,6). Los resultados
indican que la expresión de UBI en D. kuscheli no es afectada por la
infección con MRCV, por lo que UBI es un gen de utilidad como control
interno para estudios de cuantificación de MRCV en D. kuscheli con
diferentes niveles de infección.
Financiamiento: BID PICT Nº 0358, CONICET
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