Medizinische Physik 3: Medizinische Laserphysik [2004]

10 Flusszytometrie 219
Abb. 10.2. Beispiel einer flusszytometrischen Messung: Dargestellt ist die
Häufigkeit von Fluoreszenzsignalen gegen die relative Fluoreszenzintensität von
Partikeln einer Chromosomensuspension nach Färbung mit DAPI Flusskaryotyp
tane Detektion von mehreren Fluoreszenzparametern, wobei nur eine Laserlinie
zur Anregung genutzt wird. Von den pro Partikel gemessenen Signalen
können Pulshöhe, Halbwertsbreite oder Pulsfläche bestimmt und, logarithmisch
oder linear verstärkt, vom Computer in Form eines Wertes eines Häufigkeitshistogramms
dargestellt werden (Abb. 10.2). Bei mehreren simultan gemessenen
Parametern können die Parameter in beliebiger Kombination in
Form von zweidimensionalen Histogrammen ( ” dot-plot“) oder pseudodreidimensionalen
Verteilungen dargestellt werden. Aus diesen Histogrammen
werden die jeweiligen Sortierfenster per Software festgelegt.
Neben den optischen Parametern kann bei manchen Geräten auch noch
die Änderung des elektrischen Widerstands beim Durchgang der Zelle durch
die Düse gemessen werden (Coulter-Volumen). Meist sind jedoch Coulter-
Counter eigenständige, reine Analysegeräte, die im Gegensatz zu Flusszytometern
keine optischen Messungen oder Sortierungen zulassen.
Pro Messung können im Flusszytometer jeweils simultan zwei Subpopulationen
sortiert werden. Dazu werden die Tröpfchen, bevor sie sich vom
Flüssigkeitsstrahl trennen, dann elektrisch positiv oder negativ über den
Hüllstrom mit einem Spannungspuls von ca. ±100 V aufgeladen, wenn das
analysierte Partikel die entsprechenden Werte in dem zuvor festgelegten Parameterfenster
erfüllt. Im Schnitt trägt nur jedes zehnte Tröpfchen ein Partikel.
Häufig werden zur sicheren Trennung 3–5 Tröpfchen pro Sortierpuls
geladen. Die Tröpfchen fliegen schließlich durch ein Kondensatorfeld von einigen
kV Potentialdifferenz (typisch ±2 kV), worin die geladenen Tröpfchen in
entsprechende Sortiergefäße, auf Nitrozellulosefilter oder auf Objektträger für
die Mikroskopie sortiert werden.