Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

5.4 Präparation von rekombinantem hAgo2 und hTRBP
GST
hAgo2
A
kDa
1 2
130
95
72
55
43
B
kDa
130
95
72
1 2
55
43
Abbildung 5.10: Anitätschromatographische Reinigung von GST-hAgo2 im präparativen Maÿstab
(siehe Abschnitt 4.3.8). (A) Erste Reinigung mit minimaler Ausbeute. Detektion durch Coomassie-
Färbung. (B) Repräsentative wiederholte Reinigung mit stark gesteigerter Ausbeute. Detektion durch
Coomassie-Färbung. Die Banden vollständig translatierter Zielproteine sind mit einem Pfeil gekennzeichnet.
zentriert, B: mittelstark konzentriert, C: schwach konzentriert). Die Konzentration aller Fraktionen
wurde gemessen (A 280 ), die enzymatische Aktivität von GST-hAgo2 getestet (siehe
Abschnitt 5.5.2) und die Präparationen auf mögliche Nuklease-Verunreinigungen untersucht
(siehe Abschnitt 5.5.1). Mit Hilfe der wiederholten Beladung und Elution konnten pro Gramm
Bakterienzellen etwa 6,4 mg GST-hAgo2 gereinigt werden. Die Fraktionen geringer Proteinkonzentration
wurden durch Ultraltration eingeengt, alle Chargen aliquotiert und bei 20 ◦ C
bis zur weiteren Verwendung gelagert.
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