Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

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A Anhang meinen Freunden für Verständnis, Unterstützung und Ablenkung, wann immer es nötig war. meiner Familie für ihren nie enden wollenden Rückhalt und die Unterstützung auf meinem Weg. Ich habe Euch viel zu verdanken. meinem Mann Matthias ich danke Dir für all Deine Hilfe, Dein Verständnis und Deine Begleitung auf diesem Weg, den ich ohne Dich nicht hätte gehen können. Du hast mitgeebert und mitgelitten, wofür ich Dir immer dankbar sein werde. 238
Andrea Deerberg Persönliche Daten Geburtsdatum 21. April 1982 Geburtsort Tübingen Familienstand verheiratet Nationalität deutsch Sprachkenntnisse englisch französich italienisch verhandlungssicher (TOEFL) gute Kenntnisse Grundkenntnisse seit 04/2008 seit 10/2007 Ausbildung Promotion Thema der Dissertation: Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung und Spaltung von target RNA durch humanes Argonaute2 Protein Institut für Molekulare Medizin, UKSH und Universität zu Lübeck Studium der Medizin Universität zu Lübeck 2006 2007 Diplomarbeit Thema der Diplomarbeit: Strukturelle und funktionelle Charakterisierung des Proteins WAIT-1 und seiner Rolle bei der Aktivierung des Enzyms Neutrale Sphingomyelinase Institut für Immunologie, Christian-Albrechts-Universität zu Kiel 2002 2007 Studium der Biochemie und Molekularbiologie Christian-Albrechts-Universität zu Kiel, Diplom, Gesamtnote 1,15 (ausgezeichnet) 2001 2002 Studium der Biologie und Chemie University of St. Andrews/Groÿbritannien 1988 2001 Schulausbildung Gymnasium des Paul-von-Denis-Schulzentrums Schierstadt, Abitur, Gesamtnote 1,1 (sehr gut)
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Aus dem Institut für Molekulare Me
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Inhaltsverzeichnis 1 Zusammenfassun
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4.3.3 Gelelektrophorese zur Analyse
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5.12 Untersuchung des Einusses von
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1 Zusammenfassung Die RNA-Interfere
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Summary RNA interference (RNAi) is
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2 Einleitung 2.1 Über die Bedeutun
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2.2 Genregulation durch RNA-Interfe
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2.2 Genregulation durch RNA-Interfe
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2.3 Die Familie der Argonaute Prote
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2.4 Die strukturellen und molekular
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2.4 Die strukturellen und molekular
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2.5 Die Kinetik der siRNA-vermittel
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2.5 Die Kinetik der siRNA-vermittel
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2.6 Die Familie der dsRNA-bindenden
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2.6 Die Familie der dsRNA-bindenden
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2.7 Ziel dieser Arbeit der Freisetz
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3 Material Deutschland), Roche (Bas
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3 Material UV-Quarzküvetten (70 µ
Seite 50 und 51:
3 Material Stains-All Sigma-Aldrich
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3 Material Coomassie-Entfärbelösu
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3 Material Trenngelpuer (4×) 1,5 M
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3 Material pQE-T7-His-hAgo2 Eigensc
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3 Material 3.8.4 Primer Name Ago2 f
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3 Material Anti-Tetra-His (monoklon
Seite 62 und 63:
4 Methoden Mini-Präparation (klein
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4 Methoden Acrylamidkonzentration (
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4 Methoden 4.1.6 Restriktionshydrol
Seite 68 und 69:
4 Methoden 4.1.11 Kryokonservierung
Seite 70 und 71:
4 Methoden Die in vitro Transkripti
Seite 72 und 73:
4 Methoden 5'-Endmarkierung wurde u
Seite 74 und 75:
4 Methoden schwache Absorption aufw
Seite 76 und 77:
4 Methoden Komponente Sammelgel Tre
Seite 78 und 79:
4 Methoden Es wurde für 90 min ein
Seite 80 und 81:
4 Methoden Protein Temperatur der H
Seite 82 und 83:
4 Methoden Die Rückfaltung von hAg
Seite 84 und 85:
4 Methoden Reinigung von hTRBP-His
Seite 86 und 87:
4 Methoden Ansätzen zum Reaktionss
Seite 88 und 89:
4 Methoden Abbildung 4.1: Schematis
Seite 90 und 91:
4 Methoden Xenon‐Lampe Excitation
Seite 92 und 93:
4 Methoden gewertet; allerdings die
Seite 94 und 95:
4 Methoden verwendeten Lösungsmitt
Seite 96 und 97:
5 Ergebnisse NHA-hAgo2 nur in Anwes
Seite 98 und 99:
5 Ergebnisse NHA hAgo2 A kDa Gesamt
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5 Ergebnisse Konstrukte wurden mit
Seite 102 und 103:
5 Ergebnisse hTRBP H A kDa Gesamtze
Seite 104 und 105:
5 Ergebnisse NHA hAgo2 A DNaseI & T
Seite 106 und 107:
5 Ergebnisse konnte mit der bisher
Seite 108 und 109:
5 Ergebnisse Präzipitationskontrol
Seite 110 und 111:
5 Ergebnisse Studien zur Optimierun
Seite 112 und 113:
5 Ergebnisse zum Anderen den angest
Seite 114 und 115:
5 Ergebnisse 5.4.3 Entwicklung eine
Seite 116 und 117:
5 Ergebnisse die Experimente in ein
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5 Ergebnisse 5.5.3 Einuss der Tempe
Seite 120 und 121:
5 Ergebnisse In beiden Experimenten
Seite 122 und 123:
Mass (%) 5 Ergebnisse NHA hAgo2 90
Seite 124 und 125:
5 Ergebnisse NHA hAgo2 A 110 100 B
Seite 126 und 127:
5 Ergebnisse säuren und durch SYBR
Seite 128 und 129:
5 Ergebnisse Bereich bestimmen [204
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5 Ergebnisse der Gelverzögerungs-A
Seite 132 und 133:
5 Ergebnisse Oligomerisierungszusta
Seite 134 und 135:
Fluoreszenz cpm 5 Ergebnisse GST hA
Seite 136 und 137:
Fluoreszenz 5 Ergebnisse Bestimmung
Seite 138 und 139:
5 Ergebnisse mit unterschiedlichen
Seite 140 und 141:
elative Fluoreszenz relative Fluore
Seite 142 und 143:
elative Fluoreszenz k 1, obs (s -1
Seite 144 und 145:
5 Ergebnisse Entlassung des guide R
Seite 146 und 147:
5 Ergebnisse A B C FAM FAM P P‐as
Seite 148 und 149:
Fluoreszenz 5 Ergebnisse GST hAgo2
Seite 150 und 151:
5 Ergebnisse guide RNA target RNA k
Seite 152 und 153:
Fluoreszenz 5 Ergebnisse GST hAgo2
Seite 154 und 155:
5 Ergebnisse und ist somit konsiste
Seite 156 und 157:
5 Ergebnisse k = 0,0004 (± 0,00001
Seite 158 und 159:
% Umsatz % Umsatz 1/ k k (s -1 ) 5
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% Umsatz 5 Ergebnisse Einsatz der k
Seite 162 und 163:
5 Ergebnisse FAM P BHQ 2h 25°C FAM
Seite 164 und 165:
Fluoreszenz 5 Ergebnisse Wie unter
Seite 166 und 167:
Fluoreszenz Fluoreszenz 5 Ergebniss
Seite 168 und 169:
elative Fluoreszenz k 1, obs (s -1
Seite 170 und 171:
5 Ergebnisse 5.11.3 Zusammenfassung
Seite 172 und 173:
% Umsatz 5 Ergebnisse wird, stehen
Seite 175 und 176:
6 Diskussion Das Protein hAgo2 stel
Seite 177 und 178:
6.1 Untersuchung der siRNA-vermitte
Seite 179 und 180:
6.2 Stabilität von rekombinantem h
Seite 181 und 182:
6.3 Charakterisierung der siRNA-ver
Seite 183 und 184:
Seite 185 und 186:
Seite 187 und 188:
Seite 189 und 190:
Seite 191 und 192:
Seite 193 und 194:
Seite 195 und 196:
Seite 197 und 198: 6.3 Charakterisierung der siRNA-ver
Seite 199 und 200: 6.4 Charakterisierung der siRNA-Bin
Seite 201 und 202: 6.4 Charakterisierung der siRNA-Bin
Seite 203 und 204: 6.5 Modell der minimalen rekombinan
Seite 205 und 206: 6.6 Ausblick einer konformationelle
Seite 207 und 208: 7 Literaturverzeichnis [1] Paterson
Seite 209 und 210: 7 Literaturverzeichnis [23] Stefani
Seite 211 und 212: 7 Literaturverzeichnis [47] Czech,
Seite 213 und 214: 7 Literaturverzeichnis [70] Gregory
Seite 215 und 216: 7 Literaturverzeichnis [93] Lee, D.
Seite 217 und 218: 7 Literaturverzeichnis [115] Aravin
Seite 219 und 220: 7 Literaturverzeichnis [136] Ohrt,
Seite 221 und 222: 7 Literaturverzeichnis [160] Montgo
Seite 223 und 224: 7 Literaturverzeichnis [184] Schube
Seite 225 und 226: 7 Literaturverzeichnis [208] Tian,
Seite 227 und 228: 7 Literaturverzeichnis [227] Lee, K
Seite 229 und 230: 7 Literaturverzeichnis [250] Ehresm
Seite 231: 7 Literaturverzeichnis [272] van Ho
Seite 234 und 235: A Anhang Bindungspartner miteinande
Seite 236 und 237: A Anhang mit B = Basislinie der Aut
Seite 238 und 239: A Anhang Erk extrazellulär regulie
Seite 240 und 241: A Anhang NMR nuclear magnetic reson
Seite 242 und 243: A Anhang Å Ångström µF Mikrofar
Seite 244 und 245: A Anhang 5.34 Pre-steady state Asso
Seite 246 und 247: A Anhang 5.5 Übersicht über die b
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Seite 252 und 253: Publikationsliste Originalartikel 2
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