Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

5 Ergebnisse
NHA
hAgo2
A
kDa
Gesamtzelllysat
0 1 2
lösliche
Fraktion
0 1 2
unlösliche
Fraktion
0 1 2
h n.I.
95
72
55
43
34
hAgo2
H
B
kDa
Gesamtzelllysat
0 1 2
lösliche
Fraktion
0 1 2
unlösliche
Fraktion
0 1 2
h n.I.
C
kDa
-His
95
72
95
72
55
55
43
34
43
34
D
kDa
95
72
Gesamtzelllysat
0 2 4
lösliche
Fraktion
0 2 4
H
hAgo2
unlösliche
Fraktion
0 2 4 h n.I.
E
kDa
95
72
-hAgo2
-His
55
43
34
55
43
Abbildung 5.2: Expression verschiedener hAgo2-Fusionsproteine (siehe Abschnitt 4.3.6). Die Anzucht
der E. coli Stämme BL21(DE3)-pET24a(+)-NHA-hAgo2, BL21(DE3)-pET41b(+)-hAgo2-His bzw.
BL21(DE3)-pQE-T7-His-hAgo2 erfolgte in TFB-Medium bei 37 ◦ C. Die Proteinexpression wurde für
2 h (A, B, C) oder 4 h (D, E) induziert. E. coli Zellextrakte wurden auf die Anwesenheit der Zielproteine
sowie ihre Verteilung auf die lösliche und unlösliche Fraktion untersucht. (A) Western-Analyse von
NHA-hAgo2 mittels α-HA-Antikörper. (B, C) Western-Analysen von hAgo2-His mittels α-hAgo2- (B)
bzw. α-His-Antikörper (C). (D) Detektion von His-hAgo2 durch Coomassie-Färbung. (E) Western-
Analyse von His-hAgo2 mittels α-hAgo2- bzw. α-His-Antikörper. Die Banden vollständig translatierter
Zielproteine sind mit einem Pfeil gekennzeichnet. h n.I.: Stunden nach Induktion.
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