Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

6.2 Stabilität von rekombinantem hAgo2 und hTRBP
hAgo2 ist deshalb fraglich.
6.2 Stabilität von rekombinantem hAgo2 und hTRBP
In dieser Arbeit zeigte sich, dass die untersuchten RISC-Komponenten hAgo2 und hTRBP
in vitro zur Bildung von Multimeren neigen. Für hAgo2 ist dieser Umstand in der Literatur
bislang nicht ausführlich beschrieben. Für hTRBP konnte bereits gezeigt werden, dass die
Bildung von oligomeren Strukturen von der Proteinkonzentration abhängt [204]. In jedem
Fall wird die Frage nach einer biologischen Relevanz für die Tendenz zur Bildung von Protein-
Protein-Wechselwirkungen aufgeworfen.
Ein Hinweis auf die physiologische Rolle dieses in vitro beobachteten Phänomens liegt in
der Vielzahl der Proteine, mit denen hAgo2 und hTRBP wechselwirken. Für hAgo2 ist bislang
u. a. die Wechselwirkung mit den an der RNAi beteiligten Proteinen Dicer, TRBP und PACT
[79, 146148], den GW182-Paralogen TNRC6A und B [147, 149, 150], DCP1a und 2 [85],
TTP [151], der Methyltransferase PRMT5 [147], dem Translationsinitiationsfaktor eIF4E sowie
Rck/p54 [152] nachgewiesen. hTRBP kann neben hAgo2, PACT und Dicer [216, 217, 234]
die PKR [262] und das mit dem Zytoskelett assoziierte Protein Merlin [263] binden. Auÿerdem
wiesen Laraki et al. nach, dass TRBP und PACT Homodimere bilden [217]. Es ist davon
auszugehen, dass sowohl hAgo2 als auch hTRBP weitere Interaktionspartner besitzen, deren
Identität noch nicht bekannt ist. Diese Vielzahl an Wechselwirkungen deutet darauf hin, dass
die Proteine in einem zellulären Signalnetzwerk eingebunden sind und ihre Funktion durch die
Interaktion mit verschiedenen Faktoren individuell moduliert werden kann. Möglicherweise
kommt einer Homodimerisierung von hAgo2 und hTRBP eine ähnliche Rolle zu.
6.2.1 Der Oligomerisierungszustand von hAgo2 wird durch RNAs
beeinusst
Im Rahmen dieser Arbeit wurde der Oligomerisierungszustand von NHA-hAgo2 in vitro untersucht
(siehe Abschnitt 5.5.5). Dadurch konnten zum Einen Hinweise für die richtige Handhabung
von hAgo2 und darüber hinaus mit Hilfe von Dynamischer Lichtstreuung Erkenntnisse
über enzymatisch aktives hAgo2 gewonnen werden. Zuvor war durch Gröÿenausschlusschromatographie
ermittelt worden, dass ein Teil von NHA-hAgo2 in Lösung als groÿe Komplexe
vorliegt, die mindestens 10 13 Monomere umfassen. Zur Informationsgewinnung dienten
zwei Messgröÿen. Im ersten Fall lieferten Regularisierungs-Histogramme Informationen über
die Zusammensetzung der Lösung. Dadurch wurde die Anzahl verschiedener Populationen ermittelt
und diese bezüglich ihrer hydrodynamischen Radien (R h ), ihrer Polydispersität und
dem Anteil an der Gesamtmasse charakterisiert. Zum Anderen wurde der durchschnittliche
hydrodynamische Radius aller Populationen (R d ) für die Untersuchung von Einussfaktoren
auf die Proteinlösung herangezogen.
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