Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

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Aus dem Institut für Molekulare Me
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Inhaltsverzeichnis 1 Zusammenfassun
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4.3.3 Gelelektrophorese zur Analyse
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5.12 Untersuchung des Einusses von
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1 Zusammenfassung Die RNA-Interfere
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Summary RNA interference (RNAi) is
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2 Einleitung 2.1 Über die Bedeutun
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2.2 Genregulation durch RNA-Interfe
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2.2 Genregulation durch RNA-Interfe
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2.3 Die Familie der Argonaute Prote
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2.4 Die strukturellen und molekular
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2.4 Die strukturellen und molekular
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2.5 Die Kinetik der siRNA-vermittel
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2.5 Die Kinetik der siRNA-vermittel
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2.6 Die Familie der dsRNA-bindenden
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2.6 Die Familie der dsRNA-bindenden
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2.7 Ziel dieser Arbeit der Freisetz
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3 Material Deutschland), Roche (Bas
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3 Material UV-Quarzküvetten (70 µ
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3 Material Stains-All Sigma-Aldrich
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3 Material Coomassie-Entfärbelösu
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3 Material Trenngelpuer (4×) 1,5 M
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3 Material pQE-T7-His-hAgo2 Eigensc
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3 Material 3.8.4 Primer Name Ago2 f
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3 Material Anti-Tetra-His (monoklon
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4 Methoden Mini-Präparation (klein
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4 Methoden Acrylamidkonzentration (
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4 Methoden 4.1.6 Restriktionshydrol
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4 Methoden 4.1.11 Kryokonservierung
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4 Methoden Die in vitro Transkripti
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4 Methoden 5'-Endmarkierung wurde u
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4 Methoden schwache Absorption aufw
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4 Methoden Komponente Sammelgel Tre
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4 Methoden Es wurde für 90 min ein
Seite 80 und 81:
4 Methoden Protein Temperatur der H
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4 Methoden Die Rückfaltung von hAg
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4 Methoden Reinigung von hTRBP-His
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4 Methoden Ansätzen zum Reaktionss
Seite 88 und 89:
4 Methoden Abbildung 4.1: Schematis
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4 Methoden Xenon‐Lampe Excitation
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4 Methoden gewertet; allerdings die
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4 Methoden verwendeten Lösungsmitt
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5 Ergebnisse NHA-hAgo2 nur in Anwes
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5 Ergebnisse NHA hAgo2 A kDa Gesamt
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5 Ergebnisse Konstrukte wurden mit
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5 Ergebnisse hTRBP H A kDa Gesamtze
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5 Ergebnisse NHA hAgo2 A DNaseI & T
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5 Ergebnisse konnte mit der bisher
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5 Ergebnisse Präzipitationskontrol
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5 Ergebnisse Studien zur Optimierun
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5 Ergebnisse zum Anderen den angest
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5 Ergebnisse 5.4.3 Entwicklung eine
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5 Ergebnisse die Experimente in ein
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5 Ergebnisse 5.5.3 Einuss der Tempe
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5 Ergebnisse In beiden Experimenten
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Mass (%) 5 Ergebnisse NHA hAgo2 90
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5 Ergebnisse NHA hAgo2 A 110 100 B
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5 Ergebnisse säuren und durch SYBR
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5 Ergebnisse Bereich bestimmen [204
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5 Ergebnisse der Gelverzögerungs-A
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5 Ergebnisse Oligomerisierungszusta
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Fluoreszenz cpm 5 Ergebnisse GST hA
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Fluoreszenz 5 Ergebnisse Bestimmung
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5 Ergebnisse mit unterschiedlichen
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elative Fluoreszenz relative Fluore
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elative Fluoreszenz k 1, obs (s -1
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5 Ergebnisse Entlassung des guide R
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5 Ergebnisse A B C FAM FAM P P‐as
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Fluoreszenz 5 Ergebnisse GST hAgo2
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5 Ergebnisse guide RNA target RNA k
Seite 152 und 153:
Fluoreszenz 5 Ergebnisse GST hAgo2
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5 Ergebnisse und ist somit konsiste
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5 Ergebnisse k = 0,0004 (± 0,00001
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% Umsatz % Umsatz 1/ k k (s -1 ) 5
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% Umsatz 5 Ergebnisse Einsatz der k
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5 Ergebnisse FAM P BHQ 2h 25°C FAM
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Fluoreszenz 5 Ergebnisse Wie unter
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Fluoreszenz Fluoreszenz 5 Ergebniss
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elative Fluoreszenz k 1, obs (s -1
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5 Ergebnisse 5.11.3 Zusammenfassung
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% Umsatz 5 Ergebnisse wird, stehen
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6 Diskussion Das Protein hAgo2 stel
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6.1 Untersuchung der siRNA-vermitte
Seite 179 und 180: 6.2 Stabilität von rekombinantem h
Seite 181 und 182: 6.3 Charakterisierung der siRNA-ver
Seite 199 und 200: 6.4 Charakterisierung der siRNA-Bin
Seite 201 und 202: 6.4 Charakterisierung der siRNA-Bin
Seite 203 und 204: 6.5 Modell der minimalen rekombinan
Seite 205 und 206: 6.6 Ausblick einer konformationelle
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Seite 209 und 210: 7 Literaturverzeichnis [23] Stefani
Seite 211 und 212: 7 Literaturverzeichnis [47] Czech,
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