Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

A.3 Abbildungsverzeichnis
5.9 Repräsentative anitätschromatographische Reinigung von GST-hAgo2 unter
optimierten Bedingungen im analytischen Maÿstab . . . . . . . . . . . . . . . . 101
5.10 Anitätschromatographische Reinigung von GST-hAgo2 im präparativen Maÿstab
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
5.11 Anitätschromatographische Reinigung von hTRBP-His im präparativen Maÿstab
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 104
5.12 Nachweis der Spaltungsaktivität von rekombinantem hAgo2 . . . . . . . . . . . 107
5.13 Spaltungsaktivität von NHA-hAgo2 bei verschiedenen Temperaturen . . . . . . 108
5.14 Spaltungsaktivität von GST-hAgo2 bei verschiedenen MgCl 2 -Konzentrationen . 109
5.15 Regularisierungs-Histogramm der Dynamischen Lichtstreuung durch 24,1 µM
NHA-hAgo in Rückfaltungspuer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
5.16 Regularisierungs-Histogramm der Dynamischen Lichtstreuung isolierter Populationen
von NHA-hAgo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113
5.17 Untersuchungen zum Aggregationsverhalten von enzymatisch aktivem NHAhAgo2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114
5.18 Untersuchungen zur Nukleinsäurebindung durch hTRBP-His mittels Gelverzögerungs-Analysen
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117
5.19 Analyse des Oligomerisierungszustandes von hTRBP-His in An- bzw. Abwesenheit
von siRNA mittels analytischer Gelltration . . . . . . . . . . . . . . . . . 119
5.20 Zusammensetzung einer 12,14 µM hTRBP-His-Lösung . . . . . . . . . . . . . . 120
5.21 Regularisierungs-Histogramm der Dynamischen Lichtstreuung durch 12,14 µM
hTRBP-His in Lagerpuer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121
5.22 Übersicht über die verwendeten siRNA-Substrate . . . . . . . . . . . . . . . . . 123
5.23 Bestimmung der Afnität von hAgo2 zu P-as2B-FAM . . . . . . . . . . . . . . 124
5.24 Bestimmung der Anität von hAgo2 zu OH-as2B-FAM . . . . . . . . . . . . . 125
5.25 Bestimmung der Anität von hAgo2 zu P-si2B-FAM . . . . . . . . . . . . . . . 126
5.26 Pre-steady state Assoziationskinetik von NHA-hAgo2 und 5'-phosphorylierter
versus unphosphorylierter guide RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127
5.27 Übersicht über die verwendeten guide RNAs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 129
5.28 Pre-steady state Dissoziationskinetik von NHA-hAgo2 und 5'-phosphorylierter
versus unphosphorylierter guide RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130
5.29 Pre-steady state Assoziationskinetik von NHA-hAgo2 und siRNA . . . . . . . . 132
5.30 Pre-steady state Dissoziationskinetik von NHA-hAgo2 und siRNA . . . . . . . . 133
5.31 Schematische Darstellung der Fluoreszenzänderung bei Bildung ternärer Komplexe
unter Verwendung dreier experimenteller Ansätze . . . . . . . . . . . . . . 136
5.32 Bestimmung der Anität des binären Komplexes zur target RNA . . . . . . . . 138
5.33 Pre-steady state Assoziationskinetik von binärem GST-hAgo2/P-as2B-FAM-
Komplex und s2B-BHQ als target RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139
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