Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...
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5.12 Untersuchung des Einusses von hTRBP auf die <strong>siRNA</strong>-vermittelte targetRNA-Spaltung<br />
0,0012 (± 0,00006) s -1 gesteigert. Dieses Ergebnis deutet darauf hin, dass hTRBP-His die target<br />
RNA-Spaltung durch mit doppelsträngiger <strong>siRNA</strong> programmiertes hAgo2 erleichtert.<br />
Um dieses Ergebnis zu untermauern, wurde das Experiment statt mit hTRBP-His mit<br />
hPACT-His wie<strong>der</strong>holt. Es wurde freundlicherweise von J. Heidemann zur Verfügung gestellt.<br />
Beide Proteine weisen vor allem in ihren dsRNA-bindenden Motiven hohe Homologien untereinan<strong>der</strong><br />
auf (siehe Abschnitt 2.6.1). Statt s2B wurde als target RNA das ICAM-1-IVT<br />
eingesetzt. Abbildung 5.49 zeigt das Ergebnis des Experiments.<br />
Im Gegensatz zu hTRBP-His führt die Anwesenheit von hPACT-His im Spaltungsansatz<br />
nicht zu einer Steigerung <strong>der</strong> target RNA-Spaltung durch hAgo2 (siehe Abbildung 5.49 A).<br />
Im Gegenteil scheint <strong>der</strong> Prozess durch hPACT-His gehemmt zu werden, was die Spezität<br />
des zuvor durch hTRBP-His beobachteten för<strong>der</strong>nden Eektes unterstreicht. Auch dieses<br />
Ergebnis lieÿ sich reproduzieren. Der maximale Umsatz <strong>der</strong> target RNA-Spaltung ist im<br />
Reaktionsansatz mit hPACT-His mit 6,9 (± 0,46) % im Vergleich zum Reaktionsansatz ohne<br />
hPACT-His mit 21,1 (± 1,9) % um zwei Drittel vermin<strong>der</strong>t (siehe Abbildung 5.49 B). Die korrespondierenden<br />
Geschwindigkeitsratenkonstanten (k -hPACT-His = 0,0003 (± 0,00006) s -1 bzw.<br />
k +hPACT-His = 0,0006 (± 0,0001) s -1 ) weisen keine groÿe Abweichung auf. hPACT-His scheint<br />
also die target RNA vor <strong>der</strong> Spaltung durch hAgo2 zu schützen.<br />
Oensichtlich sind in beiden Experimenten Eekte durch unspezische RNA-Degradation zu<br />
beobachten, was die Quantizierung erschwert und die ermittelten Werte beeinusst. Deshalb<br />
können die Ergebnisse nur als erste Hinweise auf den möglichen Einuss von hTRBP-His und<br />
hPACT-His auf die <strong>siRNA</strong>-vermittelte target RNA-Spaltung durch hAgo2 dienen. Weitere<br />
Experimente werden in Zukunft nötig sein, um die Rolle <strong>der</strong> beiden dsRNA-bindenden Proteine<br />
in <strong>der</strong> RNAi im Detail zu untersuchen.<br />
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