Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

4 Methoden
Xenon‐Lampe
Excitations‐
Monochromator
Messzelle
Kantenfilter
Photomultiplier
Abbildung 4.2: Schematischer Aufbau einer stopped ow Anlage. Die beiden Bindungspartner benden
sich getrennt voneinander in zwei Vorratsspritzen, deren Kolben zeitgleich pneumatisch mit einem
Druck von 8 bar angetrieben werden. Die Lösungen gelangen in die Mischkammer, wo sie sich sehr
schnell vermischen. Von dort ieÿt das Gemisch in die Messzelle. Am anderen Ende der Zelle bendet
sich die Stoppspritze, in die der in der Messzelle bendliche Inhalt (ca. 50 µl) verdrängt wird und
über ihren Kolben einen Schalter betätigt. Dadurch wird zum Einen der Fluss der Reaktionsmischung
gestoppt und zum Anderen die Aufzeichnung der Fluoreszenzmessung gestartet. Die Dauer dieses
Vorgangs wird als Totzeit bezeichnet und determiniert die Zeitauösung des Geräts (ca. 2 ms). Das
Reaktionsgemisch in der Messzelle wird vom Licht einer Xenon-Lampe bestrahlt, dass zuvor einen Monochromator
passiert (Anregungswellenlänge 490 nm). Das emittierte Fluoreszenzlicht passiert einen
Kantenlter, der nur Strahlung mit Wellenlängen gröÿer als 530 nm durchtreten lässt. Die Detektion
erfolgt im rechten Winkel zur Anregung mit Hilfe eines Photomultipliers.
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