Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

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hier vorgestellten Ergebnisse stellen eine Basis dar, um diese Eekte genauer zu untersuchen.
Die Erkenntnisse zur Erkennung und Bindung der target RNA durch den binären hAgo2/
guide RNA-Komplex können als Ausgangspunkt dienen, um die target RNA-Erkennung im
Detail zu verstehen. Hierfür ist eine Kartierung der Interaktionsbereiche denkbar, indem Fehlpaarungen
oder modizierte Nukleotide an unterschiedlichen Positionen von guide oder target
RNA eingeführt werden. Solche Experimente sollten über die Erkenntnisse dieser Arbeit hinaus
wertvolle Einblicke in den Mechanismus liefern. Weiterhin bieten die etablierten experimentellen
Systeme die Möglichkeit, Fragestellungen wie dem Einuss der target RNA-Länge oder
der Thermodynamik von guide/target RNA-Paaren auf die Bindungsreaktion auf den Grund
zu gehen.
Die Geschwindigkeit des katalytischen Schrittes konnte im Rahmen dieser Arbeit nicht eindeutig
bestimmt werden. Die Sensitivität des verwendeten Systems war nicht ausreichend
hoch, um einen robusten Wert zu ermitteln. Dies erfordert in Zukunft entweder die Steigerung
der Sensitivität des vorhandenen oder den Aufbau eines neuen experimentellen Systems,
um dieses Ziel zu erreichen. Diese Ratenkonstante würde das kinetische Modell komplettieren
und möglicherweise wertvolle Erkenntnisse über die PIWI Domäne von hAgo2 liefern, von der
bislang keine Röntgenkristallstruktur gelöst werden konnte.
Zusammenfassend ist festzuhalten, dass die vorliegende Arbeit die Grundlage bildet, um in
Zukunft rekombinantes hAgo2 sowie hTRBP weitergehend zu charakterisieren. Somit sollten
auch weiterhin Erkenntnisse gewonnen werden können, die dabei helfen, dieses vielseitige und
hoch spezische Enzym in vitro und in seinem zellulären Kontext zu verstehen.
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