Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

3 Material
pQE-T7-His-hAgo2
Eigenschaften:
Vektor:
Herkunft:
Kana r , kodiert für hAgo2∆N1 mit His 6 -Markierung am N-Terminus,
hAgo2-Gen optimiert für die Expression in E. coli.
pQE-T7 (Qiagen)
im Rahmen dieser Arbeit kommerziell erworben
pG-si2B(+)
Eigenschaften:
Vektor:
Herkunft:
Amp r , T7 Promotor, kodiert für den Teil des ICAM-1 Gens, der die komplementäre
Sequenz zu as2B enthält sowie eine NotI-Schnittstelle für die
Linearisierung des Plasmids zur Terminierung der in vitro Transkription.
pGEM-T (Promega)
C. Geist
3.8.2 Oligonukleotide
Die verwendeten Nukleinsäuren wurden von den Firmen Biomers oder IBA synthetisiert und
mittels HPLC oder PAGE gereinigt. Die Konzentration wurde photometrisch bestimmt und
die Reinheit überprüft (siehe Abschnitt 4.2.1). Die Integrität wurde mittels denaturierender
PAGE kontrolliert (siehe Abschnitt 4.1.3). Ribonukleotide sind als Kleinbuchstaben dargestellt
(acgu), Desoxyribonukleotide als Groÿbuchstaben (ACGT).
DNA-Oligonukleotide
Name
TEV pET41b fwd
TEV pET41b rev
Sequenz (5' → 3')
CTA GTG AAA ACC TGT ACT TCC AGG GTC TTA AGG GAG GTC ATA
TGG GAG GTG TCG ACA AGC TTC TCG AGG GAG GTA CCG GTC TGG
TTC CGC GTG GTT CTC ACC ACC ACC ACC ACC ACT AAG C
TCA GCT TAG TGG TGG TGG TGG TGG TGA GAA CCA CGC GGA ACC
AGA CCG GTA CCT CCC TCG AGA AGC TTG TCG ACA CCT CCC ATA
TGA CCT CCC TTA AGA CCC TGG AAG TAC AGG TTT TCA
RNA-Oligonukleotide und siRNAs
Name Sequenz (5' → 3') Ziel-mRNA
as2B guide uag agg uac gug cug agg cTT ICAM-1 [182]
s2B passenger gcc uca gca cgu acc ucu aTT ICAM-1 [182]
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