Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

6 Diskussion
Komplexen, die gespaltene oder ungespaltene target RNA enthalten, stellt dieses Ergebnis
einen weiteren Hinweis auf die Existenz eines die Spaltproduktfreisetzung erleichternden Faktors
dar. Die Identität dieses Faktors muss allerdings noch aufgeklärt werden.
6.3.5 Minimales kinetisches Modell der Wirkungsweise von hAgo2
Die in den Abschnitten 5.7 5.10 gewonnenen sowie in den Abschnitten 6.3.1 6.3.4 diskutierten
Daten dienten zur Etablierung eines minimalen kinetischen Modells der siRNAvermittelten
target RNA-Spaltung durch hAgo2. Dies ist in Abbildung 6.1 gezeigt. Weiterhin
fasst dieser Abschnitt die wesentlichen Erkenntnisse zu den einzelnen Schritten des Gesamtprozesses
übersichtlich zusammen.
Programmierung von hAgo2 Bei der Beladung von hAgo2 mit einzel- oder doppelsträngiger
siRNA ist eine dreiphasige Reaktion zu beobachten. Die Ratenkonstanten k 1/-1
k 3/-3 sind in Tabelle 5.2 zusammengefasst. Den gröÿten Einuss auf die Bindung von nichtphosphorylierter
guide RNA oder doppelsträngiger siRNA besitzt k -2 .
Erkennung und Bindung von target RNA Dieser Prozess besitzt ebenfalls einen dreiphasigen
Reaktionsverlauf. Er wird im Wesentlichen durch die Interaktion der target RNA
mit der Nukleinsäure-Komponente des binären Ribonukleoprotein-Komplexes beeinusst. Die
zugehörigen ermittelten Raten k 4/-4 k 6/-6 sind in Tabelle 5.4 zusammengefasst. Dabei ist
eine unterschiedliche Bezeichnung der Ratenkonstanten zu beachten.
hAgo2 + siRNA
k 1
k -1
[hAgo2-siRNA] initial
k 2
k -2
[hAgo2-siRNA] inter
k 3
k -3
[hAgo2-siRNA]
target
k -4
k 4
[hAgo2-siRNA-target] initial
k -5
k 5
[hAgo2-siRNA-target] inter
k -6
k 6
[hAgo2-siRNA]
A + B
k 8
k -8
[hAgo2-siRNA-A-B]
k 7
[hAgo2-siRNA-target] katalytisch
Abbildung 6.1: Kinetisches Modell der siRNA-vermittelten target RNA-Spaltung durch hAgo2. Erläuterungen
siehe Text.
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