Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

A Anhang
5.34 Pre-steady state Assoziationskinetik von binärem GST-hAgo2/guide RNA-Komplex
und komplementärer bzw. nicht-komplementärer target RNA . . . . . . . . 141
5.35 Pre-steady state Dissoziationskinetik von binärem Komplex und target RNA . . 142
5.36 Kinetik der guide RNA-vermittelten Spaltungsreaktion von target RNA durch
GST-hAgo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 145
5.37 Spaltungsaktivität von GST-hAgo2 nach Programmierung mit drei verschiedenen
siRNA-Substraten . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147
5.38 Michaelis-Menten-Kinetik der guide RNA-vermittelten Spaltungsreaktion von
target RNA durch GST-hAgo2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 148
5.39 Schema des experimentellen Aufbaus zur Untersuchung des katalytischen Schrittes
der siRNA-vermittelten target RNA-Spaltung durch hAgo2 . . . . . . . . . 149
5.40 Spaltungsaktivität präassemblierter ternärer Komplexe in An- und Abwesenheit
kompetierender RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150
5.41 Schema des experimentellen Aufbaus zur Untersuchung der Produktfreisetzung
nach target RNA-Spaltung durch hAgo2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 152
5.42 target RNA-Umsatz bei Einsatz verschiedener Nukleinsäurekombinationen . . . 153
5.43 Kinetik der Freisetzung von 5'-Spaltprodukten nach guide RNA-vermittelter
target RNA-Spaltung durch GST-hAgo2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
5.44 Bestimmung der Afnität von hTRBP-His zu intern markierter einzelsträngiger
und doppelsträngiger siRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 156
5.45 Bestimmung der Afnität von hTRBP-His zu endständig markierter doppelsträngiger
siRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 157
5.46 Pre-steady state Assoziationskinetik von hTRBP-His und siRNA . . . . . . . . 158
5.47 Pre-steady state Dissoziationskinetik von hTRBP-His und siRNA . . . . . . . . 159
5.48 Einuss von hTRBP-His auf die Spaltungsaktivität von GST-hAgo2 nach seiner
Programmierung mit doppelsträngiger siRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 161
5.49 Einuss von hPACT-His auf die Spaltungsaktivität von GST-hAgo2 nach seiner
Programmierung mit doppelsträngiger siRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 162
6.1 Kinetisches Modell der siRNA-vermittelten target RNA-Spaltung durch hAgo2 188
6.2 Modell der minimalen rekombinanten RNA-Interferenz . . . . . . . . . . . . . . 194
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