Biochemische Charakterisierung der siRNA-vermittelten Erkennung ...

3 Material
Trenngelpuer (4×) 1,5 M Tris (pH 8,8)
Tris-Acetat-EDTA (TAE, 50×) 2 M Tris-HCl (pH 8,5)
2 M Essigsäure
50 mM EDTA
Tris-Borat-EDTA (TBE, 10×) 890 mM Tris (pH 8,3)
890 mM Borsäure
20 mM EDTA
Tris-gepuerte Saline (TBS, 1×) 100 mM Tris-HCl (pH 7,4)
150 mM NaCl
Tris-gepuerte Saline mit Tween 20 (TBS-T, 1×) 100 mM Tris-HCl (pH 7,4)
150 mM NaCl
0,05 % (v/v) Tween 20
Tris-EDTA (TE, 1×) 10 mM Tris-HCl (pH 7,4)
1 mM EDTA
3.7 Bakterienkultur
3.7.1 Bakterienstämme
Stamm
Genotyp
E. coli BL21(DE3) F - ompT hsdS B (r - Bm - B) gal dcm rne 131 (DE3)
E. coli DH5α F - endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG
φ80dlacZ ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169, hsdR17(r - Km + K), λ
3.7.2 Nährmedien für die Bakterienkultur
Alle Medien wurden zur Sterilisation für 20 min bei 121 ◦ C autoklaviert. Für die selektive
Anzucht von Bakterienstämmen mit Antibiotikaresistenzgen-enthaltenden Plasmiden wurden
Selektionsmedien nach dem Autoklavieren mit 30 µg/ml Kanamycin, 50 µg/ml Kanamycin
oder 50 µg/ml Ampicillin sowie Kombinationen aus Kanamycin und Ampicillin versetzt. Für
die Präparation von Agar-Platten wurde dem jeweiligen Flüssigmedium vor dem Autoklavieren
15 g/l Agar beigemischt und vor dem Aushärten in sterile Petrischalen gegossen.
Name
Bestandteile
Phosphatpuer (10×, pH 7,3) 720 mM K 2 HPO 4
170 mM KH 2 PO 4
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