3. Uluslararası Beyaz Et Kongresi

Örneklerde ham enerji düzeyi adiabatik bir bomba kalorimetre kullanılarak benzoik asitin
standart olarak kullanılması ile belirlenmiştir. Analiz yapılacak örnekler nitrik-perklorik
asit yaş yakma metodu ile yakılmış ve elde edilen yakılmış örneklerde Cr, Ca ve P analizleri
yapılmıştır. Örneklerdeki P miktarı, asit molibdat ve Fiske-Subbarow indirgeyici solüsyonu
kullanılarak fosfomolibden kompleksi oluşturulması ve ardından da P konsantrasyonunun
bir spektrofotometrede 620 nm dalga boyunda okunması ile hesaplanmıştır. Elde edilen
süpernatantda Ca konsantrasyonu bir alev atomik absorpsiyon spektrometresi kullanılarak
belirlenmiştir. Amino asit analizi için ketencik küspeleri 24 saat boyunca 6 N HCl` de 110 °C
de bir atmosfer azot basıncı altında tutularak hazırlanmıştır. Tüm amino asit analizleri Missouri
Üniversitesi Kimyasal Analiz Laboratuvarı, Columbia tarafından yapılmıştır.
Glukosinolat Analizi
Desülfoglukosinolat ekstraktı daha önce bildirilen protokole uygun olarak yapılmıştır (Glover
ve ark., 1988). Küspe örnekleri eterde ekstrakte edilmiş ve bundan alınan 20 mg örnek 20
µL sinigrin içeren 400 µL % 50 metanolde 10 dakika boyunca 80 °C de inkübe edilmiştir.
Santrifüjün ardından (yaklaşık 10 dakika), 300 µL süpernatant 200 µL QAE sephadex resin ile
karıştırılmış ve oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edilmiştir. Ardından sephadex resin % 50` lik
metanol ile yıkanmıştır. Yıkanan resin 5 µL sülfataz ile beraber 100 µL suda 37 °C de 8 saat
boyunca inkübe edilmiştir. Tekrar santrifüjün ardından elde edilen süpernatant 90 mL etanol
ile karıştırılmış ve tekrar 4000 g` de 15 dakika santrifüj edilmiştir. Elde edilen pelet 25 mL
deiyonize suda çözülmüş ve analiz edilene kadar -20 °C` de saklanmıştır. Santrifüjün ardından
elde edilen desülfoglukosinolatlar HPLC` de tayin edilmiştir.
Jejunal Barsak İçeriklerinde Viskozite Tayini
Yaklaşık olarak 12 g barsak içeriği 50 mL` lik bir santrifüj tüpüne konulmuş ve 10 saniye boyunca
vortekslenmiştir. Ardından aynı örnek 10,000 g` de 4 °C` de 10 dakika boyunca santrifüje
edilmiştir. Elde edilen süpernatant 2 mL hacimdeki örnek kaplarına aktarılmıştır. Örneği içeren
kap daha önceden 40 °C` ye ısıtılmış bir su banyosunda yaklaşık olarak 15 dakika boyunca
tutulmuştur. Bu örneklerde viskozite miktarı bir vizkometre kullanılarak belirlenmiştir. Sonuçlar
centipoise (cP) olarak ifade edilmiştir.
Hesaplamalar ve İstatistik Analiz
Besin maddeleri ve enerjinin (ME ve IDE) metabolize olabilirlik katsayısı (C) aşağıdaki denklik
kullanılarak belirlenmiştir: C = 1 − [(Crd/CrO) × (EO/EI)]. Elde edilen bu katsayı ve diyetin
ham enerji düzeyi kullanılarak diyetin ME değeri belirlenmiştir. Diyetin azota göre düzeltilmiş
metabolize olabilir enerji miktarı 8.22 kcal/kg N düzeyi referans alınarak belirlenmiştir. Deneme
yemine referans yeminin ve test ham maddesinin oransal enerji katkıları Prd + Pti = 1 olarak
belirlenen denklem kullanılarak belirlenmiştir. Buradan da Ctd = (Crd x Prd) + (Cti x Pti)
denklemine gidilerek en son olarak Cti = [Crd + (Ctd – Crd)/ Pti] şeklindeki denklemden de test
ham maddesi için metabolize olabilirlik katsayısı belirlenmiştir.
Veriler General Linear Models prosedürü (SAS Institute, 2006) kullanılarak rastlantısal komple
blok dizayna göre analiz edilmiştir. Artan düzeylerdeki ketencik küspesinin bu düzeylerinin
linear ve quadratik kontrastları belirlenmiştir. Test ham maddesi kaynaklı enerji alımının
tüketilen ham madde miktarına regrese edilmesi ile de denklemlere ulaşılmıştır (Littell ve ark.,
1995). Kafes bölmeleri deneme ünitesi olarak kullanılmıştır. Glukosinolat miktarının iki küspe
arasındaki kıyaslanması ise student t-testi kullanılarak yapılmıştır.
272