3. Uluslararası Beyaz Et Kongresi

neden olabileceği noktasına dikkat çekilmesinde yarar vardır.
Giriş
Avian infectious bronchitis (IB) hastalığı tüm dünyada tavukçuluk sektöründe önemli ekonomik
kayıplara neden olan, her yaş grubundaki tavukları etkileyen, hızlı yayılan viral bir hastalıktır.
IB ilk kez 1930 yılında Amerika Birleşik Devletlerinde tavuklarda akut solunum yolu hastalığı
olarak tanımlanmış, 1936 yılında ise etkeni olan Avian Coronavirus (Avian infectious bronchitis
virus- IBV) izole edilmiştir (OIE, 2008). İnfeksiyon sonucu görülen kilo kaybı, yumurtacı
ve damızlıklarda yumurta veriminde düşüş, yumurta kalitesinin bozulması ve mortalite gibi
nedenlerle önemli ekonomik kayıplar şekillenmektedir (McMartin, 1993). Bu kayıplarda IBV S1
geni varyant suşları önemli rol oynamaktadır. Avrupa Birliği COST-1207 aksiyonu çerçevesinde
TÜBİTAK (Proje No: 113O411) tarafından desteklenen bu çalışmada, infeksiyöz bronşitis
virüsünün yumurtacı ve broylerlerde hızlı tanısı, izolasyonu ve S1 geni varyant infeksiyöz
bronşitis viruslarının sekans ve filogenetik analizleri amaçlandı.
Materyal ve Metot
Örnekler
Çalışmada Marmara, Batı Karadeniz, Akdeniz ve İç Anadolu bölgesindeki 14 yumurtacı
kümesteki tavuklardan alınan trakeal svablar ve 38 broyler kümesteki solunum problemleri olan
broylerlerden alınan trakeal doku (her kümesten 4) örnekleri IBV varlığı yönünden TaqMan real
time RT-PCR ile araştırıldı.
RNA Ekstraksiyonu ve cDNA
Doku örneklerinden ve virus izolasyonu amacıyla kullanılan embriyolu SPF tavuk yumurtasından
inkübasyon sonunda toplanan koryo-allantoik sıvıdan viral RNA ekstraksiyonu için ticari kit
olarak PureLink® RNA Mini Kit (Invitrogen) ve svab örneklerinden RNA ekstraksiyonu için
ise PureLink® Viral RNA/DNA Kit (Invitrogen) kullanıldı ve kitle belirtilen yöntem uygulandı.
RNA’dan complementer DNA (cDNA) elde edilmesi amacıyla Improm II kiti (Improm II
reverse transkriptase-Promega) kullanıldı ve iki aşamalı olarak Yilmaz ve ark. (2011) tarafından
bildirilen yöntem temel alındı.
TagMan Real-time RT-PCR
IBV’unun hızlı saptanması amacıyla Prob reaksiyonlu real-time RT-PCR kullanıldı. Bu amaçla
Callison ve arkadaşlarının önerdiği primerler literatürde belirtilen protokol uygulanarak çalışıldı
(Callison ve ark. 2006).
S1 Geni Sekans Analizi
C T
değeri düşük (virus yükü yüksek) olan örneklerden 9-11 günlük embryolu SPF yumurtalara
ekimler yapıldı. Saptanan sirrusların Dr. I. Monne (kişisel görüşme) ve Worthington ve ark.,
(2008) tarafından S1 geni için tasarlanan primerler ile kısmi sekans analizi yapıldıktan sonra
ülkemiz ve diğer ülkelerden bildirilen IBV sekansları ile karşılaştırılarak filogenetik analizler
sonucu soyağacı oluşturuldu.
Bulgular
İncelenen piliçlerin bazılarının histopatolojik incelemelerinde trakealarında farklı yoğunluk
ve yaygınlıkta olmak üzere mukoza epitelinde, desiliasyon, mukoza ve bez epitel hücrelerinde
408