Organikum Organisch-chemisches Grundpraktikum

72 A. Einführung in die Laboratoriumstechnik
regulierung dient ein Flußregler mit Nadelventil, der auf das Lösungsmittelreservoir aufgesetzt
wird (Abb. A. 102). Alle Schliffverbindungen der Apparatur werden durch Klemmen oder
Schraubverschlüsse gesichert.
Als stationäre Phasen verwendet man außer den polaren Adsorbentien Kieselgel und Aluminiumoxid
auch die unpolaren, hydrophoben Umkehrphasen (vgl. A.2.7.). Für die Chromatographie
an Kieselgel und Aluminiumoxid werden n-Hexan, Petrolether, Methylenchlorid, Toluol, Tetrahydrofuran
und Ethylacetat als Elutionsmittel eingesetzt, häufig Gemische aus Ethylacetat und
n-Hexan oder Petrolether. DC-Vorversuche eignen sich für die Auswahl des Trennsystems. Das
Mengenverhältnis von Probe, Adsorbens und mobiler Phase soll etwa l: 100 : l 000 betragen.
Die in der mobilen Phase gelöste Probe wird auf die stationäre Phase aufgebracht, das
Lösungsmittelreservoir aufgesetzt und über den Flußregler eine Fließgeschwindigkeit des EIutionsmittels
von ~ 5 cm/min eingestellt. Wie bei der einfachen Säulenchromatographie wird
das Eluat per Hand oder automatisch in Fraktionen geeigneter Größe gesammelt. Die eluierten
Substanzen können durch DC, IR- oder UV-VIS-Spektroskopie, feste Stoffe auch durch
Schmelzpunktbestimmung des Rückstands nachgewiesen werden. Ein Stoffgemisch kann
innerhalb von 5 bis 10 Minuten getrennt werden.
2.7.3. Hochdruckflüssigchromatographie (HPLC)
Die Hochdruckflüssigchromatographie (engl. high pressure liquid chromatography), auch
Hochleistungsflüssigchromatographie (high performance liquid chromatography), HPLC
genannt, ist eine sehr leistungsfähige, schnelle Säulenflüssigchromatographie für die Trennung
von Substanzgemischen im analytischen und präparativen Maßstab. Es werden stationäre Phasen
sehr kleiner Korngröße (3 bis 10 /im) und enger Korngrößenverteilung verwendet, durch
die das Elutionsmittel unter hohem Druck (50 bis 500 bar) gepreßt wird. Hierfür stehen automatisierte
kommerzielle Geräte zur Verfügung, deren Aufbau schematisch Abbildung A.103
zeigt. Die Säule besteht gewöhnlich aus Edelstahl und hat bei analytischen Anwendungen
einen Durchmesser von 2 bis 5 mm. Die verwendeten Trägermaterialien ergeben dichte und
regelmäßige Säulenpackungen hoher Trennwirkung, so daß kurze Säulen von 5 bis 25 cm
Länge ausreichen. Sie haben Trennstufenzahlen [A.105] von l 000 bis zu 100 000.
Elutionsmittel Pumpe
Thermostat *
Probenaufgabe
*Trennsaule
Schreiber
Integrator
Detektor Fraktionssammler
Abb. A.103
Schematischer Aufbau eines
Hochdruck-Flüssigchromatographen