SEMNAS Hortikultura Buku 2 - Departemen Pertanian

Validasi Metode Deteksi Bakteri Xanthomonas campestris pv. vesicatoria Menggunakan Media Selektif dan Uji
Patogenisitas
Sulastrini, I., Murtiningsih, R., O. Setiani Gunawan, dan A.S. Duriat
Penyebaran ini juga dimungkinkan karena belum diterapkannya standardisasi mutu benih
berdasarkan pengujian yang akurat dan seksama. Hal ini diperlukan baik untuk produksi benih
domestik maupun impor benih. Karena itu perlu dilakukan penelitian untuk mendapatkan metoda
deteksi yang cepat dan akurat yang sesuai dengan standarisasi international dan kapasitas
laboratorium yang dipunyai.
Metode pengujian yang cepat dan akurat dapat dipergunakan dalam standardisai mutu benih
yang dapat mengimbangi peraturan yang ditetapkan ISTA (International Seed Testing Assosiation)
(Anonim, 1986). Disamping itu untuk mendeteksi suatu penyakit pada benih dapat dilakukan dengan
berbagai cara seperti ELISA, menggunakan media selektif dan uji patogenisitas, atau gabungan dari
berbagai cara pengujian yang akan mendapatkan hasil yang sangat akurat. Namun demikian metode
pengujian tersebut perlu divalidasi untuk konfirmasi dan pembuktian yang efektif bahwa suatu
metode telah memenuhi suatu persyaratan tertentu yang telah ditentukan. Validasi adalah konfirmasi
melalui pengujian dan pengadaan bukti yang objektif bahwa persyaratan tertentu untuk suatu maksud
khusus dipenuhi (SNI 19-17025-2000 Klausul 5.4.5.1) (Anonim, 2000).
Berdasarkan hal tersebut diatas maka tujuan penelitian ini adalah mendapatkan metode yang
tepat dan akurat dalam mendeteksi bakteri Xanthomonas campestris pv. vesicatoria pada tanaman
cabai merah dan tomat. Diharapkan hasil penelitian ini dapat dipergunakan dalam standardisasi mutu
benih yang mampu mengimbangi peraturan yang ditetapkan ISTA dengan kapasitas dan sumber daya
manusia yang ada. Juga informasi yang dihasilkan dari kegiatan ini diharapkan dapat diadopsi oleh
para pengguna dalam pengujian ksehatan benih untuk patogen dan sayuran yang lain. Melalui
penggunaan peraturan pengujian benih sehat secara internasional, sehingga benih sayuran ekspor
Indonesia dapat bersaing di pasar bebas.
BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di laboratorium penyakit dan rumah kassa Balai Penelitian Tanaman
Sayuran di Lembang pada bulan September – Desember 2005. Penelitian ini terdiri atas 2 kegiatan
meliputi :
1. Uji validasi metode deteksi patogen bakteri Xcv pada benih cabai dan tomat. Metode deteksi
yang divalidasi meliputi deteksi bakteri Xvc dengan menggunakan dua media tumbuh selektif
untuk bakteri yaitu CKTM dan mTMB.
2. Uji patogenisitas
Uji patogenitas menggunakan 2 jenis metode yaitu :
a. Penyuntikan pada epidermis daun
b. Penyuntikan pada ketiak daun
Bahan yang digunakan dalam kegiatan ini adalah : benih tomat varietas Oval, benih cabai
varietas Tit super, isolat bakteri target Xcv, media tanam mTMB dan CKTM, akuades steril, spiritus,
etanol teknis 95%, syringe 1 mL, kantung plastik, PBT, dan buffer saline.
Alat yang digunakan meliputi: inkubator, mikroskop, cawan petri, tabung reaksi, mortar dan
pestle, mikropipet dan tipnya, gelas ukur, autoklaf, vortex, laminar air flow cabinet, bunsen dan glass
rod.
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 20
kombinasi perlakuan diulang 10 kali.
Pelaksanaan uji validasi pada media tumbuh selektif
Benih cabai merah dan tomat yang telah terkontaminasi bakteri Xcv ini sulit ditemukan, oleh
karena itu pada pengujian ini dilakukan inokulasi buatan bakteri Xcv pada benih cabai merah dan
tomat. Sebanyak 5 g benih cabai merah dan 5 g benih tomat dibagi menjadi 5 kelompok masingmasing
seberat 1 g (sekitar 150-200 butir). Benih kemudian diberi kontaminan suspensi bakteri target
pada konsentrasi 0, 1x10 6 , 1x10 8 , 1x10 10 , dan 1x10 12 cfu dengan perbandingan 15 mL suspensi bakteri
untuk 1g benih, kemudian diaduk rata dan inkubasi selama 2 jam pada suhu kamar. Benih kemudian
digerus perlahan-lahan dalam mortar sampai benih hancur. Masing-masing benih cabai dan tomat
yang terkontaminasi dibuat pengenceran dengan cara 1 mL suspensi benih dilarutkan dalam 9 mL
198│
Prosiding SeminarNasional Pekan Inovasi Teknologi Hortikultura Nasional: Penerapan Inovasi Teknologi Hortikultura
dalam Mendukung Pembangunan Hortikultura yang Berdaya Saing dan Berbasis Sumberdaya Genetik Lokal,
Lembang, 5 Juli 2012