SEMNAS Hortikultura Buku 2 - Departemen Pertanian

Validasi Metode Deteksi Bakteri Xanthomonas campestris pv. vesicatoria Menggunakan Media Selektif dan Uji
Patogenisitas
Sulastrini, I., Murtiningsih, R., O. Setiani Gunawan, dan A.S. Duriat
larutan buffer saline. Kemudian dibuat seri pengenceran yaitu 10 -1 dan 10 -2 . Sebanyak 0.1 mL
suspensi pada tiap seri pengenceran ditanam pada permukaan media (CKTM dan mTMB) dalam
cawan petri dan diratakan dengan pengaduk kaca bentuk L (glass rod). Setelah masing-masing petri
dish diberi label kemudian diinkubasi dalam inkubator pada temperatur 30C. Pengamatan dilakukan
mulai pada umur isolat 2 hari setelah inokulasi media. Peubah yang diamati adalah jumlah, bentuk,
dan warna koloni bakteri.
Pelaksanaan uji patogenitas
Menyiapkan tanaman cabai muda dan tomat berumur kurang lebih 4 minggu (mempunyai 4 –
5 helai daun) masing-masing sebanyak 250 tanaman. Selain itu juga dipersiapkan suspensi bakteri Xcv
dengan konsentrasi 10 0 , 10 6 , 10 8 , 10 10 , dan 10 12 cfu/mL yang telah disentrifugasi masing-masing
selama 10 menit. Supernatan yang diperoleh digunakan sebagai inokulum patogen. Sebanyak 0.5 mL
supernatan disuntikkan ke tanaman dengan dua cara penyuntikan yaitu penyuntikan pada ketiak daun
dan pada epidermis daun. Penyuntikan dimulai dengan suspensi kontrol, dilanjutkan konsentrasi yang
lebih tinggi secara bertahap. Tanaman yang telah disuntik, disungkup dengan plastik. Pengamatan
dilakukan 7 hari setelah inokulasi.
Peubah yang diukur:
a. Uji validasi metoda deteksi patogen tular benih penting pada cabai dan tomat
(1) sensitivitas metode deteksi dan
(2) keakuratan metode deteksi.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Uji Validasi
Berdasarkan hasil pengamatan bentuk koloni yang muncul pada media mTMB dan CKTM
pada umumnya didominasi oleh bentuk bulat, dengan warna dominan putih kekuningan. Koloni yang
muncul pada media mTMB berwarna putih kekuningan dan disekitarnya seperti ada asap (Gambar 1),
sedangkan pada media CKTM warna koloni lebih kuning cerah.
Gambar 1. Bakteri Xanthomonas campestris pv vesicatoria pada media mTMB (kiri)
dan media CKTM (kanan)
Populasi bakteri yang tumbuh pada pengenceran 10 -1 sulit untuk dihitung karena
populasinya sangat padat bersatu antara satu koloni dengan yang lainnya, hal ini karena
konsentrasinya terlalu tinggi. Sedangkan pada pengenceran 10 -2 koloni yang timbul lebih mudah
dihitung, dengan kerapatan berkisar 0,28 – 1,17 CFU/mL.
Prosiding SeminarNasional Pekan Inovasi Teknologi Hortikultura Nasional: Penerapan Inovasi Teknologi Hortikultura
dalam Mendukung Pembangunan Hortikultura yang Berdaya Saing dan Berbasis Sumberdaya Genetik Lokal,
Lembang, 5 Juli 2012
│199