Abbas 8ed - Imunologia Celular e Molecular

anticorpos valiosos reagentes para a detecção, purificação e quantificação dos
antígenos. Pelo fato de os anticorpos poderem ser produzidos contra virtualmente
qualquer tipo de macromoléculas e pequenas moléculas químicas, as técnicas
baseadas em anticorpos podem ser usadas para estudar virtualmente qualquer tipo
de molécula em solução ou nas células. O método para a produção de anticorpos
monoclonais (Cap. 5) aumentou significativamente nossa habilidade em gerar
anticorpos de quase qualquer especificidade desejada. Historicamente, muitos dos
usos dos anticorpos dependiam da habilidade do anticorpo e da especificidade do
antígeno em formar grandes imunocomplexos, ou em solução ou em géis, que
pudessem ser detectados por vários métodos óticos. Estes métodos foram de grande
importância nos estudos iniciais, mas atualmente foram substituídos quase que
completamente por métodos mais simples baseados em anticorpos ou antígenos
imobilizados.
Quantificação de Antígeno por Imunoensaios
Métodos imunológicos de quantificação da concentração de antígeno fornecem
sensibilidade e especificidade extraordinárias e se tornaram técnicas-padrão para
ambas as pesquisas e aplicações clínicas. Todos os métodos imunoquímicos de
quantificação são baseados em ter um antígeno ou anticorpo puro cujas quantidades
podem ser medidas por uma molécula indicadora (ou um marcador). Quando o
antígeno ou anticorpo é marcado com um radioisótopo, como primeiramente
introduzido por Rosalyn Yalow et al., ele pode ser quantificado por instrumentos que
detectam os eventos de decaimento radioativo; o ensaio é denominado
radioimunoensaio (RIA, do inglês radioimmunoassay). Quando o antígeno ou
anticorpo é acoplado covalentemente a uma enzima, ele pode ser quantificado pela
determinação, com um espectrofotômetro, da taxa na qual a enzima converte um
substrato límpido em um produto colorido; o ensaio é denominado ensaio
imunossorvente ligado à enzima (ELISA, do inglês enzyme-linked
immunosorbent). Existem várias variações no RIA e no ELISA, porém a versão mais
comumente utilizada é o ensaio em sanduíche (Fig. A-1). Este ensaio usa dois
anticorpos diferentes reativos com diferentes epítopos em um antígeno cuja
concentração necessita ser determinada. Uma quantidade fixa de um anticorpo é
ligada a uma série de réplicas em suporte sólido, tais como placas plásticas de
micropoços. As soluções de teste contendo o antígeno em concentração
desconhecida ou uma série de soluções-padrão com concentrações conhecidas do
anticorpo são adicionadas aos poços e deixadas aderir. O antígeno não ligado é
removido por lavagem, e um anticorpo secundário, que é uma enzima ligada ou
radiomarcada, é adicionado também para aderir. O antígeno serve como uma ponte,
de tal forma que quanto mais antígeno houver em solução ou nas soluções-padrão,
mais enzima ligada ou anticorpo secundário radiomarcado irá se ligar. Os resultados