Abbas 8ed - Imunologia Celular e Molecular

FIGURA A-5 Análise de ligação antígeno-anticorpo por
diálise de equilíbrio.
Na presença do anticorpo (B), a quantidade de antígeno
dentro da membrana de diálise é aumentada em
comparação com a ausência de anticorpo (A). Como descrito
no texto, essa diferença, causada pela ligação do anticorpo
ao antígeno, pode ser usada para medir a afinidade do
anticorpo ao antígeno. Este experimento pode ser realizado
somente quando o antígeno é uma molécula pequena (p. ex.,
um hapteno capaz de cruzar livremente a membrana de
diálise).
Uma maneira alternativa de determinar o Kd é pela medição das taxas de
formação e dissociação do complexo antígeno-anticorpo. Estas taxas dependem, em
parte, das concentrações de anticorpo e antígeno e da afinidade desta interação.
Todos os parâmetros, exceto as concentrações, podem ser resumidos como razões
constantes, e ambas razão constante (Kon) e razão sem constante (Koff) podem ser
calculadas experimentalmente com a determinação das concentrações e taxas reais
de associação ou dissociação, respectivamente. A razão de Koff/Kon permite anular
todos os parâmetros não relacionados com a afinidade e é exatamente igual à
constante de dissociação Kd. Assim, pode-se medir Kd no equilíbrio com a diálise de
equilíbrio ou calcular o Kd a partir de taxas constantes de medidas sob condições
sem equilíbrio.
Outro método, mais comumente utilizado, para medir as cinéticas das interações
antígeno-anticorpo depende da ressonância do plásmon da superfície. Neste método,
um instrumento biossensor especializado (p. ex., Biacore) utiliza um método ótico