Abbas 8ed - Imunologia Celular e Molecular

B com Especificidade Antigênica Simples
Para examinar os efeitos da ligação de antígenos às células B, investigadores têm
tentado isolar células B específicas para antígenos a partir de populações complexas
de linfócitos normais ou produzir linhagens de células B clonais com especificidades
antigênicas definidas. Estes esforços têm alcançado pouco sucesso. Entretanto,
camundongos transgênicos foram desenvolvidos onde virtualmente todas as células
B expressam Ig transgênica de especificidade conhecida, de tal forma que a maioria
das células B nestes camundongos responde ao mesmo antígeno. Um procedimento
um pouco mais sofisticado foi criado para produzir camundongos knockin em
receptor de antígeno, nos quais genes das cadeias H e L de Ig reorganizados foram
homologamente recombinados em seu lócus endógeno. Tais animais knockin
provaram ser particularmente úteis na verificação da edição de receptor.
Métodos para Medidas da Proliferação das Células B e
Produção de Anticorpo
Muito do nosso conhecimento a respeito da ativação da célula B se baseia nos
experimentos in vitro, nos quais diferentes estímulos são usados para ativar células B
e sua proliferação e diferenciação podem ser medidas com precisão. Os mesmos
ensaios podem ser realizados com células B recuperadas de camundongos
expostos a diferentes antígenos ou com células B homogêneas expressando
transgene que expressam receptores de antígeno.
A proliferação da célula B é medida com o uso de marcação com CFSE ou
incorporação de 3 H-timidina in vitro e marcação in vivo com BrdU, como descrito
anteriormente para a proliferação de células T.
A produção de anticorpo é medida de duas maneiras diferentes: com ensaios para
a secreção cumulativa de Ig, que mede a quantidade de Ig que se acumula no
sobrenadante de linfócitos em cultura ou no soro de um indivíduo imunizado, e com
ensaios com uma célula, que determina o número de células em uma população
imune que secreta Ig de uma especificidade particular ou isotipo. A técnica mais
precisa, quantitativa e utilizada para medir a quantidade total de Ig no sobrenadante
de uma cultura ou amostra de soro é o ELISA. Com o uso de antígenos ligados a
suportes sólidos, é possível o uso do ELISA para quantificar a quantidade de
anticorpo em uma amostra específica para um antígeno em particular. Além disso, a
disponibilidade de anticorpos anti-Ig que detectam Igs de distintas classes de cadeias
pesada e leve permite a medida de quantidades de isotipos diferentes em uma
amostra. Outras técnicas para medir os níveis de anticorpo incluem hemaglutinação
para anticorpos antieritrócitos e lise dependente de anticorpo para anticorpos
específicos para tipos celulares conhecidos. Ambos os ensaios são baseados na
demonstração de que, se a quantidade de antígeno (i.e., células) é constante, a