Abbas 8ed - Imunologia Celular e Molecular

sódio dodecil sulfato (SDS)-poliacrilamina e transferidos para
uma membrana, podem ser detectados por um anticorpo que
é revelado por um anticorpo secundário que pode estar
conjugado a uma enzima, como a horseradish peroxidase,
ou a um fluoróforo.
A técnica de transferência das proteínas do gel para a membrana é chamada de
Western blotting como uma brincadeira do bioquímico. Southern é o último nome do
cientista que primeiro fez um blot de DNA separando um gel para uma membrana por
transferência capilar, uma técnica desde então denominada como Southern blotting.
Por analogia, o Nothern blotting foi o termo aplicado à técnica de transferência de
RNA de um gel para uma membrana e Western blotting é o termo utilizado para
descrever a transferência de proteínas para a membrana.
Marcação e Detecção de Antígenos em Células e
Tecidos
Anticorpos específicos para antígenos expressos em tipos celulares particulares são
comumente utilizados para identificar essas células em tecidos ou suspensões
celulares e para separar estas células de populações misturadas. Nestes métodos, o
anticorpo pode ser marcado com radioatividade, ligado à enzima ou, mais
comumente, marcado com fluorescência e um sistema de detecção é usado para
identificar o anticorpo ligado. Anticorpos ligados a partículas magnéticas podem ser
utilizados para isolar fisicamente células que expressam antígenos específicos.
Citometria de Fluxo e Separação de Células Ativadas
por Fluorescência
A linhagem tecidual, o estado de maturação ou o estado de ativação de uma célula
frequentemente podem ser determinados pela análise da superfície celular ou
expressão intracelular de diferentes moléculas. Esta técnica é comumente usada
para coloração da célula com marcadores fluorescentes que são específicos para
aquelas moléculas e medida da quantidade de fluorescência emitida pela célula (Fig.
A-4). O citômetro de fluxo é um instrumento especializado que pode detectar a
fluorescência de células individuais em uma suspensão e, assim, determinar o
número de células que expressam a molécula à qual o marcador fluorescente se liga.
Suspensões de células são incubadas com marcadores fluorescentes, e a
quantidade de marcador ligado a cada célula na população é medida com a
passagem das células individuais através do fluorímetro com um feixe incidente de
laser. As quantidades relativas de uma molécula em particular em diferentes
populações de células podem ser comparadas com coloração de cada população