PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
CONTAGEM DE MICRORGANISMOS MESÓFILOS AERÓBIOS VIÁVEIS
5.1 Preparo da amostra
Após a pré-incubação, as amostras visualmente inalteradas devem ser agitadas por 25
vezes.
Antes da abertura, desinfetar externamente as embalagens com solução desinfetante
e após com etanol 70% ou etanol 70º GL. Deixar secar.
Com auxílio de tesouras ou bisturis previamente esterilizados, abrir a embalagem.
Caso se observe alteração evidente (coagulação, ß oculação, dessoração, odor não
característico ou outros), interromper a análise e reportar como “produto alterado após
incubação a 36 ± 1ºC por 7 dias”.
As amostras que apresentarem qualquer alteração não devem ser analisadas.
Reportar o resultado como “amostra alterada”, incluindo informações sobre o tipo de
alteração observada.
5.2 Procedimentos de controle
Aplicar os procedimentos de controle especíÞ cos estabelecidos pelo laboratório.
5.3 Contagem em placas
Diluir a amostra em tubos contendo 9 mL de solução salina peptonada 0,1% até 10 -2 .
Pipetar 1mL diretamente da amostra (10 0 ) e 1 mL de cada uma das diluições preparadas
(10 -1 e 10 -2 ), transferindo-as para placas de Petri estéreis, em duplicata.
Adicionar cerca de 20 mL de ágar cérebro-coração (ABHI) a uma das placas de cada
diluição. Nas demais, adicionar cerca de 20 mL de ágar nutriente isento de extrato de
levedura.
Homogeneizar adequadamente os meios com os inóculos.
Deixar solidiÞ car. Inverter as placas.
5.4 Incubação
Incubar as placas a 30 ± 1°C por 72 horas.
5.5 Leitura
VeriÞ car a presença de colônias nas placas, contando cada uma e observando suas
características.
Selecionar placas que contenham entre 25 e 250 colônias para a realização da
contagem.
Se os resultados de contagem obtidos em ambos os meios forem coerentes entre
si, proceder conforme Anexo IV, “Procedimentos para contagem de colônias”, deste
Manual.
Se os resultados forem discrepantes entre si, considerar o resultado obtido nas
placas de ABHI.
Quando o crescimento bacteriano é devido à presença de esporos de Bacillus
sporothermodurans na amostra em análise, será observado nas placas de ABHI
um abundante crescimento de colônias lisas, de forma regular, com coloração entre
branco e bege, com diâmetro máximo de 3 mm, facilmente identiÞ cáveis.
No ágar nutriente isento de extrato de levedura, o Bacillus sporothermodurans
comumente não forma colônias visíveis, porém poderão se desenvolver colônias
puntiformes, de coloração entre branco e bege.
Esta diferenciação é necessária porque as colônias de B.sporothermodurans não
devem ser contabilizadas no cálculo de mesóÞ los aeróbios viáveis capazes de
causar alteração no produto.
Quando for observado crescimento em ambos os meios, realizar a contagem nas
placas de ABHI, registrando em separado o número de colônias suspeitas de serem
379