PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
5.7.2 Prova da catalase
Com auxílio de alça de platina, palito de madeira, bastão de vidro ou Pipeta de Pasteur
estéril, transferir a cultura para uma lâmina de vidro contendo uma gota de peróxido
de hidrogênio a 3%.
A não formação de borbulhas indica prova negativa para catalase.
A formação de borbulhas indica prova positiva para catalase.
No caso da presença de bastonetes Gram positivos, resultados de catalase negativos
indicam a presença de Clostridium sp e resultados positivos indicam a presença de
Bacillus sp.
Quando for detectada a presença de Clostridium sp, guardar as culturas para testes
complementares, caso sejam necessários.
5.7.3 Prova da termoÞ lia estrita
Quando forem detectados bastonetes termóÞ los, realizar prova para conÞ rmação de
termoÞ lia estrita do microrganismo isolado.
A partir dos tubos com caldo glicose triptona positivos incubados a 55 ± 1ºC, repicar
maciçamente para tubos contendo ágar nutriente inclinado com sulfato de manganês
(ou ágar para esporulação).
Incubar a 55 ± 1ºC de 2 a 10 dias.
A partir do segundo dia, veriÞ car a presença de esporos por meio da aplicação da
técnica para coloração de esporos, conforme instruções constantes do Anexo VII,
“Procedimentos de coloração”, deste Manual.
Quando forem detectadas culturas esporuladas, preparar suspensão de esporos,
lavando o crescimento obtido no tubo com ágar nutriente/sulfato de manganês com 1
mL de água destilada ou deionizada estéril.
Inativar as formas vegetativas por meio da aplicação de um choque térmico a 80ºC por
15 minutos na suspensão preparada de 1 mL.
Inocular 0,1 mL do lavado, após o choque térmico, em dois tubos contendo caldo
glicose triptona.
Incubar um tubo a 36 ± 1ºC e outro a 55 ± 1ºC por 2 a 4 dias.
VeriÞ car o crescimento de microrganismos, evidenciado pela turvação do caldo.
O crescimento bacteriano somente no tubo incubado a 55 ± 1ºC determina a termoÞ lia
estrita do microrganismo isolado.
O crescimento bacteriano nos dois tubos determina a termoÞ lia facultativa do
microrganismo isolado.
Registrar no resultado Þ nal a característica mesofílica ou termofílica do microrganismo
isolado.
5.7.4 ConÞ rmação de microrganismos “ß at sour” (opcional)
A partir das culturas obtidas nas placas de ABHI, provenientes dos tubos positivos de
caldo glicose triptona incubados a 55 ± 1ºC, repicar para a superfície seca de 2 placas
com ágar glicose triptona. Incubar uma das placas a 36 ± 1ºC por 72 horas e a outra
a 55 ± 1ºC por 48 horas em câmara úmida.
O crescimento de colônias amarelas, regulares, com diâmetro de aproximadamente
2 a 3 mm, rodeadas de zona de clariÞ cação também amarela, nas placas incubadas
a 55 ± 1ºC, com núcleo opaco e o não crescimento naquelas incubadas a 36 ± 1ºC,
conÞ rmará a presença de Bacillus stearothermophilus (renomeado - Geobacillus
466 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS