PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
Procedimentos de Coloração
7.1 Coloração com fucsina básica
1. Repicar a cultura em ágar nutriente inclinado;
2. Incubar a 30 ± 1ºC por 24 horas e posteriormente em ambiente por 2 a 3 dias;
3. Preparar esfregaço em lâmina de vidro limpa;
4. Secar ao ar e Þ xar rapidamente passando sobre uma chama de bico de Bunsen;
5. Mergulhar em álcool metílico, deixando em contato por 30 segundos. Retirar e
deixar secar ao ar.
6. Corar com solução de fucsina básica 0,5% a quente (aproximar o máximo possível
de uma chama de bico de Bunsen e deixar até que desprenda vapor. Afastar do
fogo e após 1 a 2 minutos repetir a operação;
7. Esperar cerca de 30 segundos para que a lâmina esfrie e lavá-la com água;
8. Observar ao microscópio com objetiva de imersão.
Os corpúsculos de inclusão cristalina do Bacillus thuringiensis se apresentam como
pequenos discos de bordas convexas (em forma de grão de lentilha) de cor rosa
intensa.
7.2
Coloração com azul de Coomasie
7.2.2 Preparo da solução Corante – azul de Coomasie
Azul coomasie ......................................................................................................0,25 g
Metanol ................................................................................................................50 mL
Ácido acético glacial ..............................................................................................7 mL
Água destilada ....................................................................................................100 mL
7.2.3 Procedimento
1. Repicar a cultura em ágar nutriente inclinado;
2. Incubar a 30 ± 1ºC por 24 horas e, posteriormente, em ambiente por 3 a 4 dias;
3. Preparar esfregaço em lâmina de vidro limpa;
4. Secar ao ar e Þ xar rapidamente passando sobre uma chama de bico de Bunsen;
5. Cobrir o esfregaço com a solução de azul de Coomasie por 3 minutos;
6. Escorrer e lavar suavemente com água corrente;
7. Secar;
8. Observar ao microscópio com objetiva de imersão.
Os corpúsculos de inclusão cristalina do Bacillus thuringiensis se apresentam como
estruturas tetragonais de cor azul intensa.
7.3 Alternativamente, pode ser utilizada a coloração de Wirst-Konklin (verde malaquita)
para corar os corpúsculos de inclusão cristalina.
Os corpúsculos de inclusão cristalina do Bacillus thuringiensis se apresentam como
estruturas tetragonais de cor rosa, enquanto os esporos se coram em verde.
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